膀胱癌血清microRNA診斷模型的建立及其對膀胱癌復(fù)發(fā)監(jiān)測的臨床意義.pdf

1、目的:
　　通過對侵襲性膀胱癌膀胱癌、非侵襲性膀胱癌和對照血清中microRNA(miRNA)進(jìn)行高通量檢測，確定膀胱癌血清miRNA特異表達(dá)譜，建立膀胱癌血清miRNA診斷模型，并評價(jià)該miRNA模型對膀胱癌的診斷價(jià)值，同時(shí)探討血清miRNA與膀胱癌復(fù)發(fā)的關(guān)系。
　　方法:
　　1.在測序階段，利用Miseq測序的方法，選取10名侵襲性膀胱癌、10名非侵襲性膀胱癌和10名對照者血清分別混合后進(jìn)行高通量的miRNA序列

2、測定，對測序結(jié)果進(jìn)行對比分析，獲取膀胱癌血清miRNA特異表達(dá)譜，篩選出膀胱癌組與對照組間差異表達(dá)的miRNA。
　　2.在確證階段，采用qRT-PCR技術(shù)，首先在120名膀胱癌患者和120名對照者血清中對初步篩選出的差異表達(dá)miRNA進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步確定差異表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的miRNA。將確定的差異表達(dá)miRNA帶入多元logisitic回歸分析，建立膀胱癌血清miRNA診斷模型，采用受試者工作曲線(receiveroperat

3、ing characteristic curve，ROC)分析膀胱癌血清miRNA診斷模型的診斷效能。
　　3.在驗(yàn)證階段，另選取110位膀胱癌患者和110名對照者血清，采用qRT-PCR方法再次驗(yàn)證差異表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的miRNA，并評價(jià)血清miRNA診斷模型對膀胱癌的診斷價(jià)值。同時(shí)獲取110位膀胱癌患者和110名對照者的尿液標(biāo)本進(jìn)行傳統(tǒng)的尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查，對比分析膀胱癌血清miRNA診斷模型與尿液脫落細(xì)胞學(xué)對膀胱癌的診斷價(jià)值

4、。
　　4.分別跟蹤分析驗(yàn)證階段110名侵襲性膀胱癌和110名非侵襲性膀胱癌患者的復(fù)發(fā)信息。采用Kaplan-Meier方法進(jìn)行膀胱癌患者無復(fù)發(fā)生存曲線分析，通過Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分別分析可用于侵襲性膀胱癌和非侵襲性膀胱癌復(fù)發(fā)監(jiān)測的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)果:
　　1.測序階段候選miRNA的篩選:經(jīng)血清Miseq測序，共檢測了529個(gè)miRNA(≥1個(gè)拷貝)，其中在侵襲性膀胱癌組、非侵襲性膀胱癌組和對照組中分別確定了2

5、59、180和206個(gè)miRNA（≥10個(gè)拷貝）。經(jīng)初步篩選，共選取了26個(gè)在膀胱癌和對照者血清中差異表達(dá)的miRNA，其中18個(gè)miRNA在膀胱癌組血清中表達(dá)下調(diào)（miR-484，let-7b-5p，let-7a-5p，miR-30a-5p，miR-181b-5p，miR-1228-5p, miR-181a-5p, miR-27a-3p, miR-3135b, miR-3187-3p,miR-185-5p, miR-15a-5p, m

6、iR-15b-5p, miR-92b-5p, miR-342-3p, miR-501-3p,miR-148a-3p，和let-7i-5p），8個(gè)miRNA在膀胱癌組血清中表達(dá)上調(diào)(miR-24-3p, let-7c, miR-128, miR-98, miR-148b-3p, miR-30d-5p, miR-1294,和miR-152)。
　　2.在確證階段，經(jīng)qRT-PCR初次驗(yàn)證，膀胱癌血清中miR-152，miR-148b-

7、3p表達(dá)升高，miR-3187-3p，miR-15b-5p，miR-27a-3p，miR-30a-5p表達(dá)降低(均p＜0.001)。ROC評估m(xù)iR-152, miR-148b-3p, miR-3187-3p, miR-15b-5p,miR-27a-3p和miR-30a-5p診斷膀胱癌的受試者工作曲線下面積(area underthe ROC，AUC)分別為0.738，0.729，0.814，0.715，0.703和0.654。通過Lo

8、gistic多元回歸分析建立了基于六個(gè)miRNA分子的膀胱癌血清miRNA診斷模型，此診斷模型AUC為0.956（95％CI為0.922-0.978，靈敏度為90.00％，特異度為90.00％）。
　　3.在驗(yàn)證階段，經(jīng)qRT-PCR再次驗(yàn)證后表明，膀胱癌血清miRNA診斷模型AUC為0.899(95％CI為0.851-0.936，靈敏度為80.00％，特異度為89.09％)。其對Ta，T1和T2-T4期膀胱癌的靈敏度分別為90.

9、00％，84.85％，89.36％，明顯高于尿液脫落細(xì)胞學(xué)相應(yīng)的13.33％，30.30％，44.68％，（均p＜0.001）。
　　4.在非侵襲性膀胱癌患者組， Kaplan-Meier分析顯示，高表達(dá)miR-152膀胱癌患者較低表達(dá)miR-152膀胱癌患者的無復(fù)發(fā)生存率低(p=0.023)，低表達(dá) miR-3187-3p膀胱癌患者較高表達(dá)miR-3187-3p膀胱癌患者的無復(fù)發(fā)生存率低(p=0.043)。多變量Cox回歸分析顯

10、示，miR-152和臨床病理分期可以作為非侵襲性膀胱癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)(p分別為0.028和0.026)。在侵襲性膀胱癌患者組，未發(fā)現(xiàn)與膀胱癌復(fù)發(fā)相關(guān)的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論:
　　1.膀胱癌血清miRNA診斷模型(miR-152，miR-148b-3p，miR-3187-3p，miR-15b-5p，miR-27a-3p和miR-30a-5p)對膀胱癌早期診斷具有一定的臨床意義。
　　2.血清miR-152可作為非