TLR4介導(dǎo)的JNK信號通路對阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征合并高血壓大鼠脂肪細(xì)胞因子的調(diào)控.pdf

1、目的:通過觀察OSAHS合并高血壓大鼠血漿中TNF-α、Leptin水平變化，探討TOLL樣受體4(TLR4)是否通過JNK信號通路對脂肪細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)控，借此探索OSAHS合并高血壓的可能發(fā)病機(jī)制。
　　方法:將雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為3組，即:正常對照組、缺氧6周組、缺氧8周組，實驗時將實驗組大鼠放入密閉玻璃艙內(nèi)，玻璃艙內(nèi)充入氮氣和氧氣，每天缺氧8h，每次循環(huán)120秒，將正常對照組大鼠置于相同規(guī)格的玻璃艙內(nèi)，充入空氣，無缺氧

2、。于實驗前、試驗后檢測各組大鼠血壓。于間歇低氧42、56天后先后處死實驗6組和實驗8周組大鼠，采用熒光定量PCR、Westem-Blotting方法觀察脂肪組織中TLR4受體和JNK受體的表達(dá)情況，ELISA方法觀察大鼠血漿中TNF-α、Leptin含量的變化，HE染色方法觀測大鼠腎動脈的病理變化。取間歇低氧8周組大鼠脂肪組織進(jìn)行原代培養(yǎng)脂肪細(xì)胞，通過細(xì)胞免疫組織化學(xué)以及油紅O法鑒定前脂肪細(xì)胞和成熟脂肪細(xì)胞;分為4組脂肪細(xì)胞，即:間歇缺

3、氧8周模型組（缺氧8周組），間歇缺氧8周脂多糖誘導(dǎo)組（LPS誘導(dǎo)組），間歇缺氧8周TLR4阻滯組(TLR4阻滯組)，間歇缺氧8周JNK阻滯組（JNK阻滯組）。利用熒光定量PCR法和Western-blot法觀察脂肪細(xì)胞中TLR4受體、JNK受體mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，利用ELISA法觀察脂肪細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α、Leptin的含量。
　　結(jié)果:1模型組大鼠尾動脈壓增加，并且出現(xiàn)腎動脈管腔變小、腎動脈管壁變厚的病理變化，因此成功建

4、立了OSAHS合并高血壓大鼠模型。2間歇性缺氧6周組、間歇性缺氧8周組血清TNF-α、Leptin含量比正常對照組顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)，且缺氧8周組更顯著(P＜0.05)。3缺氧6周組、缺氧8周組脂肪組織中TLR4受體、JNK受體的表達(dá)水平與正常對照組相比明顯升高(P＜0.01，P＜0.01)。4培養(yǎng)出OSAHS合并高血壓模型原代大鼠脂肪細(xì)胞;采用油紅O染色方法可見脂肪細(xì)胞胞內(nèi)出現(xiàn)紅染色顆粒;采用細(xì)胞免疫組化可見細(xì)胞胞

5、漿著色成棕黃色。5TLR4介導(dǎo)JNK信號通路在脂肪細(xì)胞中的表達(dá):與間歇性缺氧8周組相比，脂多糖誘導(dǎo)劑使TLR4受體、JNK受體mRNA和蛋白的表達(dá)增加(P＜0.05，P＜0.05);TLR4阻滯劑使TLR4受體、JNK受體mRNA和蛋白的表達(dá)減少(P＜0.05，P＜0.05);JNK阻滯劑可以使JNK受體mRNA和蛋白的表達(dá)減少(P＜0.05)，而對TLR4受體mRNA和蛋白的表達(dá)無意義。6OSAHS合并高血壓模型大鼠脂肪細(xì)胞中TLR4