應(yīng)用PCR法預(yù)測牛早期胚胎性別的研究.pdf

1、本試驗(yàn)分別做了以下探討，并取得了預(yù)期的結(jié)果：(1)利用牛性別決定基因(SRY)和牛Y染色體特有重復(fù)序列(BRY4a、BRY1、MSRD)作為雄性特異性基因，ZFX/ZFY基因作為內(nèi)部對照基因，分別進(jìn)行雙重PCR擴(kuò)增，以便用于牛早期胚胎性別鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這四個(gè)引物組合建立的擴(kuò)增體系均可用于性別鑒定。通過PCR反應(yīng)條件的反復(fù)摸索和研究，最終確定適合生產(chǎn)實(shí)踐的牛早期胚胎性別鑒定的基因是牛Y染色體特異性序列BRY基因。(2)改變引物濃度、

2、模板DNA的濃度、退火溫度、調(diào)整循環(huán)條件等影響PCR因素，確定適合生產(chǎn)實(shí)踐的PCR反應(yīng)體系為：反應(yīng)體系25μL，10×Buffer2.5μL，dNTP 0.5μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，ddH2O 19.5μL，ZFX/ZFY上、下游引物各0.5μL，BRY4a上、下游引物各0.2μL，模板0.6μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性4min，94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，共28個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，4℃