PCR法鑒別哺乳動(dòng)物胚胎性別的研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)建立了用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)技術(shù)體外擴(kuò)增哺乳動(dòng)物SRY特異序列鑒別哺乳動(dòng)物胚胎性別的方法.依據(jù)牛、山羊、兔、豬等哺乳動(dòng)物Sry基因高度同源性設(shè)計(jì)一對(duì)SRY引物,兩條引物均為22個(gè)堿基,對(duì)公牛的SRY特異的163bp序列進(jìn)行體外擴(kuò)增.從公、母牛的組織或血液提取基因組DNA,用作PCR擴(kuò)增基因組DNA的模板,同時(shí)在立體顯微鏡下收集羊-兔異種克隆胚胎,先用0.145mol/LNaCl沖

2、洗2次,再移入20μL胚胎處理液中(10mmol/L Tris-HCl pH8.3,50mmol/L KCl,2mmol/LMgCl<,2>,0.45﹪ NP-40,0.45﹪Tween-20,0.1μg/μL蛋白酶K),將羊-兔異種克隆胚胎及其處理液在55℃水浴作用60min,然后將此胚胎溶解物直接作為PCR擴(kuò)增胚胎DNA的模板.采用PCR擴(kuò)增?；蚪MDNA最適條件分別擴(kuò)增了黑白花奶牛9頭(♀6,♂3)、皖北黃牛11頭(♀3,♂8)、

3、波爾三羊3只(♀2,♂1)、兔4只(♀1, ♂3)和豬7頭(♀3,♂4)的基因組DNA.所有雄性樣品中均出現(xiàn)清晰可見(jiàn)的特異DNA擴(kuò)增帶,而雌性樣品和空白對(duì)照中無(wú)擴(kuò)增片段出現(xiàn).同時(shí)采用PCR擴(kuò)增羊-兔異種克隆胚胎DNA最適條件擴(kuò)增了15個(gè)羊-兔異種克隆胚胎DNA(4個(gè)胚胎的供體為公羊,11個(gè)胚胎的供體為母羊),所有以公羊?yàn)楣w的羊-兔異種克隆胚胎樣品均出現(xiàn)清晰可見(jiàn)的特異DNA擴(kuò)增條帶,而以母羊?yàn)楣w的羊-兔異種克隆胚胎樣品和空白對(duì)照中無(wú)擴(kuò)