zRAP55，一個(gè)在斑馬魚卵母細(xì)胞中優(yōu)勢表達(dá)基因的鑒定.pdf

1、本研究分別針對zRAP55基因的生物信息學(xué)分、克隆、蛋白質(zhì)表達(dá)和熒光免疫組織化學(xué)4個(gè)方面分析了zRAP55的基因和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞中的定位和功能，結(jié)果如下： 通過對zRAP55cDNA進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)該基因位于斑馬魚第23個(gè)連鎖群上，包括9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子，其最大開放閱讀框(ORF)位于116-1264bp，編碼382個(gè)氨基酸，采用Computepl/Mwtools對zRAP55蛋白進(jìn)行預(yù)測分析，其理論等電點(diǎn)p

2、I為10.11，為一堿性蛋白質(zhì)，分子量為26.29KD。用Tmpredprogram預(yù)測到該蛋白質(zhì)的124-142氨基酸區(qū)域存在一個(gè)跨膜區(qū)域；預(yù)測結(jié)果表明該跨膜蛋白的N-terminal位于細(xì)胞膜內(nèi)。Prosite分析表明該蛋白質(zhì)包含谷氨酸富集區(qū)，而其他同源蛋白質(zhì)序列都沒有發(fā)現(xiàn)谷氨酸富集區(qū)。在NCBI、EMBL和DDBJ數(shù)據(jù)庫中zRAP55的cDNA和預(yù)測蛋白質(zhì)序列的Blast分析結(jié)果顯示：zRAP55與爪蟾(NP-001025676)

3、、小鼠(AAH40823)、人(NP_653304)、褐家鼠(EDL88837)等蛋白質(zhì)序列一致性分別為59.7％、57.3％、57.2％和56.7％，上述蛋白均包括一個(gè)Lsm14保守域。 采用RT-PCR分析了zRAP55mRNA在各個(gè)組織中的表達(dá)情況，RT-PCR的擴(kuò)增結(jié)果表明zRAP55在卵巢中表達(dá)量最高，肝臟和腎臟表達(dá)量極微弱，而腦、精巢和心臟三個(gè)組織均未檢測到表達(dá)。 熒光免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，在第I時(shí)相卵母細(xì)胞

4、和II時(shí)相卵母細(xì)胞中，zRAP55的陽性信號強(qiáng)烈，均勻地分布于整個(gè)胞質(zhì)，隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育，在第III時(shí)相卵母細(xì)胞和IV時(shí)相卵母細(xì)胞中檢測不到信號，而整體卵巢中的表達(dá)情況則進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)果。這種表達(dá)模式表明zRAP55是一個(gè)在斑馬魚卵巢中表達(dá)尤其在早期卵母細(xì)胞(I和II)中特異性表達(dá)的基因，而且zRAP55含有一個(gè)Lsmdomain，因此本研究推測在斑馬魚卵巢組織中，zRAP55可能具有調(diào)控第I和第II時(shí)相卵母細(xì)胞蛋白質(zhì)翻譯的作用。