α-硫辛酸在小鼠卵母細(xì)胞老化過程中的作用.pdf

1、哺乳動(dòng)物的繁殖能力受多種因素的影響，動(dòng)物個(gè)體本身的衰老和生殖細(xì)胞的老化嚴(yán)重影響動(dòng)物的繁殖效率，而其中卵母細(xì)胞的老化嚴(yán)重降低了雌性動(dòng)物的繁殖能力。受各種原因的影響，卵母細(xì)胞會發(fā)生不同程度的老化，這不僅造成體內(nèi)外受精率降低，胚胎質(zhì)量低下，早期妊娠流產(chǎn)可能性增加，后代發(fā)育異常等問題，而且限制了體外受精(IVF)、體細(xì)胞核移植(SCNT)及胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)等技術(shù)的快速發(fā)展及廣泛應(yīng)用。因此研究卵母細(xì)胞老化及調(diào)控機(jī)制顯得尤為重要。α-硫

2、辛酸(α-lipoic acid)是一種存在于線粒體內(nèi)的生物抗氧化劑，幾乎對所有自由基均有清除作用。本研究以小鼠卵母細(xì)胞為材料，在研究卵母細(xì)胞老化進(jìn)程的基礎(chǔ)上，通過體外添加α-硫辛酸(LA)，采用體外受精、孤雌激活、免疫熒光等技術(shù)，研究其在卵母細(xì)胞體外老化過程中的作用，同時(shí)探討α-硫辛酸和自噬在抗老化過程中的作用和聯(lián)系。
　　1、α-硫辛酸延緩卵母細(xì)胞的體外老化進(jìn)程
　　在卵母細(xì)胞的體外老化過程中，體外受精率顯著下降，由老化

3、前的87.71％±6.35％下降至67.55％±6.44％，同時(shí)受精后的細(xì)胞異常率升高，由老化前的2.05％±2.12％升高至12.85％±4.20％，細(xì)胞極性丟失（肌動(dòng)蛋白帽丟失），紡錘體形態(tài)發(fā)生異常，組蛋白H4K8和H4K12乙?；缴摺Ｔ诼涯讣?xì)胞體外老化過程中添加10μmol/L的α-硫辛酸后，與未添加組（正常老化）相比，卵母細(xì)胞的體外受精率升高至83.19％±8.00％;受精后的異常率下降至4.46％±2.07％，紡錘體形態(tài)

4、趨于正常，細(xì)胞極性尚存，組蛋白H4K8和H4K12乙?；捷^低。結(jié)果表明α-硫辛酸可以延緩卵母細(xì)胞的體外老化進(jìn)程。
　　2、α-硫辛酸抑制體外老化卵母細(xì)胞中自噬水平的升高
　　首先，檢測了卵母細(xì)胞體外老化過程中的自噬水平。結(jié)果表明，在卵母細(xì)胞體外老化10h內(nèi)，自噬水平呈逐漸升高的趨勢。其次，添加自噬增強(qiáng)劑（Rapa）或自噬抑制劑（3-MA）來為干擾自噬水平后，檢測卵母細(xì)胞老化進(jìn)程。結(jié)果顯示，與未處理組相比添加Rapa后，卵

5、母細(xì)胞的體外受精率極顯著降低(p＜0.01)，受精后的異常率顯著升高(p＜0.05);與此相反的，用3-MA處理后，卵母細(xì)胞的體外受精率升高(p＜0.05)，受精后的異常率則顯著下降(p＜0.05)。最后，在卵母細(xì)胞體外老化過程中添加α-硫辛酸后，檢測老化卵母細(xì)胞的自噬水平，結(jié)果表明自噬水平受α-硫辛酸的影響出現(xiàn)了下降。這說明卵母細(xì)胞在體外老化過程自噬水平會出現(xiàn)升高，而α-硫辛酸可以抑制其升高的程度，α-硫辛酸可能通過抑制自噬水平的升高