男性體檢人群低睪酮、代謝綜合征和頸動脈病變相關(guān)性研究及炎癥機制初探.pdf

1、第一部分男性體檢人群低睪酮、代謝綜合征及頸動脈病變相關(guān)性研究
　　背景和目的:男性低睪酮者心血管疾病患病率及嚴重程度比睪酮正常者顯著升高，低睪酮是男性心血管疾病的危險因素。許多研究顯示在男性代謝綜合征(Metabolic syndrome，MS)、糖尿病病人中睪酮與頸動脈內(nèi)中膜厚度、冠心病嚴重程度負相關(guān)，睪酮補充治療可改善血糖、血壓、血脂譜等，提示睪酮對男性心血管疾病起保護作用。本研究目的為在體檢男性中初探睪酮、代謝綜合征各組分及

2、頸動脈病變的相關(guān)性。
　　方法:選擇華山醫(yī)院東院體檢中心2012年8月至2013年2月所有行頸動脈B超檢查的男性。詢問吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病等既往史及服藥史。測量身高、體重、腰圍、臀圍、血壓等。體檢者清晨空腹采集靜脈血樣，立即檢測血糖、血脂、肝腎功能，用葡萄糖氧化酶法測血糖，GPO-PAP法測定甘油三酯，COD-PAP法測定總膽固醇，直接法測定高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇。用EP管留取血漿、血清，-35℃保存，統(tǒng)一測

3、總睪酮、游離睪酮、性激素結(jié)合球蛋白(Sex hormone binding globulin，SHBG)。采用免疫化學法檢測總睪酮、游離睪酮、SHBG。采用ALOKA-α-10型彩色多普勒超聲診斷儀行頸動脈超聲檢查。每側(cè)測量6個部位頸動脈內(nèi)中膜厚度(Intima-media thickness，IMT)，雙側(cè)共12個部位。任何部位IMT≥1mm，定義為頸動脈內(nèi)中膜增厚;局部內(nèi)中膜向管腔突出部分大于周圍內(nèi)中膜的50％定義為斑塊。據(jù)上述診斷

4、標準所有體檢人群分為:無內(nèi)膜增厚或斑塊形成歸為正常組（CA0組）;存在內(nèi)膜增厚且無斑塊形成歸為內(nèi)膜增厚組（CA1組）;有斑塊形成或斑塊合并內(nèi)膜增厚稱為斑塊形成組（CA2組），其中內(nèi)膜增厚組加斑塊形成組合稱為頸動脈病變組（CAd組）。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。采用t檢驗、單因素方差分析（LSD檢驗）分析各組間臨床特征差異，Pearson相關(guān)、spearman相關(guān)分析各指標的線性關(guān)系，多元線性回歸分析影響頸動脈病變、代謝綜

5、合征的危險因素。
　　結(jié)果:采集118例體檢人群樣本，排除4例不符合標準者（甲亢1例，腫瘤1例，服用激素2例），共入組114例男性體檢者。
　　1)該人群頸動脈病變百分比為34.2％。與CA0組比較，CAd組年齡更長，體重指數(shù)(BMI)、血糖、糖化血紅蛋白(HbA1c)、甘油三酯水平更高，游離睪酮、高密度脂蛋白膽固醇更低，均有統(tǒng)計學差異（P值均＜0.05）。
　　2) CA2組和CA1組IMT水平顯著高于CA0組（分別

6、為1.020±0.231mm、0.781±0.090mm、0.601±0.085mm，P＜0.01），CA2組IMT水平顯著高于CA1組(P＜0.01)。
　　3)游離睪酮和IMT顯著負相關(guān)（r=-0.208，P＜0.05)。游離睪酮與頸動脈病變嚴重程度顯著負相關(guān)（r=-0.297，P＜0.01)，CA2組游離睪酮水平顯著低于CA0組(72.47±17.65 pg/mlvs83.77±18.51 pg/ml，P＜0.01)。CA2

7、和CA1組、CA1組和CA0組游離睪酮無顯著差異。
　　4)該人群代謝綜合征患病百分比為52.6％，總睪酮、游離睪酮隨著代謝組分的增多而逐漸減少，SHBG和代謝組分之間無明顯的相關(guān)性。與非代謝綜合征人群相比，代謝綜合征人群總睪酮、游離睪酮、SHBG顯著降低（P均＜0.01）。
　　5)總睪酮與腰圍（r=-0.279，P＜0.01）、甘油三酯（r=-0.219，P＜0.05）、收縮壓(r=-0.247，P＜0.01)、舒張壓（

8、r=-0.293，P＜0.01）、血糖（r=-0.209，P＜0.05）顯著負相關(guān);游離睪酮與腰圍（r=-0.225，P＜0.05）、甘油三酯（r=-0.259，P＜0.01）、血糖（r=-0.359，P＜0.01）顯著負相關(guān)(P＜0.05)，與高密度脂蛋白膽固醇(r=0.339，P＜0.01)顯著正相關(guān);SHBG與腰圍（r=-0.254，P＜0.01）、甘油三脂（r=-0.194，P＜0.05）顯著負相關(guān);
　　6)頸動脈病變嚴

9、重程度與甘油三脂(r=0.214，P＜0.05)、血糖正相關(guān)(r=0.243，P＜0.01)，與高密度脂蛋白膽固醇負相關(guān)（r=-0.269，P＜0.01）。
　　7)在校正年齡、腰圍、血糖、血壓、高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯后，游離睪酮、總睪酮與頸動脈病變嚴重程度沒有相關(guān)性。
　　8)在校正年齡、抽煙、飲酒后，游離睪酮與代謝綜合征獨立相關(guān)（β=-0.062，P=0.000）。
　　結(jié)論:
　　1，本研究顯示男性低

10、睪酮與頸動脈病變顯著相關(guān)，但多元線性回歸分析未提示睪酮是頸動脈病變的獨立危險因素，考慮樣本量偏小存在偏倚;
　　2，男性低睪酮與代謝綜合征各組分相關(guān)，多元回歸分析提示睪酮是代謝綜合征的獨立危險因素。
　　第二部分睪酮通過炎癥因子對血管病變影響的研究
　　背景和目的:本課題組前期研究顯示睪酮水平與代謝綜合征組分、頸動脈血管病變嚴重程度顯著負相關(guān)，提示睪酮可能對血管內(nèi)皮細胞存在保護作用。炎癥反應(yīng)在頸動脈內(nèi)皮功能障礙發(fā)生發(fā)展

11、中起著非常重要的作用。Chemerin為2007年新發(fā)現(xiàn)的脂肪炎癥因子，參與組織免疫和炎癥應(yīng)答，提示chemerin可能是促炎因子，但chemerin與睪酮的關(guān)系未見報道。此外，腫瘤細胞壞死因子α(Tumor necrosis factor alpha，TNFα)、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、血管細胞粘附分子1(Vascular cell adhesion molecule1，VCAM1)、組織因子途徑抑制物1（

12、Tissue factor pathway inhibitor-1，TFPI-1）均是與動脈粥樣硬化過程密切相關(guān)的炎癥因子。內(nèi)皮細胞可合成分泌VCAM1和TFPI-1，同時內(nèi)皮細胞表面存在TNFα受體、IL-6受體、chemerin受體。本研究的目的在于:1）在體檢人群中探討炎癥因子chemerin、睪酮及頸動脈病變嚴重程度的相關(guān)性。2）在細胞水平初步探討睪酮對血管內(nèi)皮細胞炎癥因子或因子受體基因轉(zhuǎn)錄的影響。
　　方法:1）臨床水平

13、:選擇上述華山醫(yī)院東院體檢中心2012年8月至2013年2月所有行頸動脈B超檢查的男性。體檢者清晨空腹采集靜脈血樣，EP管留取血漿-35℃保存，采用ALOKA-α-10型彩色多普勒超聲診斷儀行頸動脈超聲檢查;用ELISA法統(tǒng)一檢測體檢人群血標本chemerin水平;免疫生化法測總睪酮、游離睪酮、性激素結(jié)合球蛋白。任何部位IMT≥1mm，定義為頸動脈內(nèi)中膜增厚;局部內(nèi)中膜向管腔突出部分大于周圍內(nèi)中膜的50％定義為斑塊。據(jù)上述診斷標準所有體

14、檢人群分為:無內(nèi)膜增厚或斑塊形成歸為正常組(CA0組);存在內(nèi)膜增厚且無斑塊形成歸為內(nèi)膜增厚組（CA1組）;有斑塊形成或斑塊合并內(nèi)膜增厚稱為斑塊形成組（CA2組），其中內(nèi)膜增厚組加斑塊形成組合稱為頸動脈病變組（CAd組）。2)細胞水平:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，選擇3-8代細胞進行實驗。細胞分為對照組和實驗組，對照組加同等劑量的無水乙醇，實驗組加入丙酸睪酮干預(yù)24小時，丙酸睪酮濃度分別為3×10-5mmol/l、3×10-6mmol/l

15、、3×10-7mmol/l、3×10-8 mmol/l、3×10-9mmol/l5種不同濃度。每個濃度做三個復(fù)孔，重復(fù)三次。干預(yù)結(jié)束后提取RNA，用RT-PCR方法檢測VCAM-1、TFPI-1、IL-6受體(gp130)、TNFα受體、chemerin受體的基因轉(zhuǎn)錄。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。采用t檢驗、單因素方差分析（LSD檢驗）分析各組間臨床特征差異，Pearson相關(guān)、spearman相關(guān)分析各指標的線性關(guān)系。

16、
　　結(jié)果:
　　1) Chemerin和頸動脈病變嚴重程度正相關(guān)(r=0.23，P＜0.05)。CA2組chemerin比CA0組顯著升高(91.428±16.401 ng/ml vs76.724±17.544ng/ml，P＜0.05); CA0組和CA1組、CA1組和CA2組chemerin均無統(tǒng)計學差異。
　　2) Chemerin和總睪酮顯著負相關(guān)（r=-0.26，P＜0.05）。
　　3)與對照組相比，

17、生理劑量（3×10-7mmol/l）及超生理劑量(3×10-6mmol/l、3×10-5mmol/l)丙酸睪酮可顯著抑制VCAM1的表達（分別平均抑制10.5％、11.2％、18.6％，P均＜0.05）。
　　4)與對照組相比，生理劑量(3×10-7mmol/l)及超生理劑量(3×10-6mmol/l、3×10-5mmol/l)丙酸睪酮可上調(diào)TFPI-1的基因轉(zhuǎn)錄（分別平均上調(diào)28.4％、38.6％、72.6％，P均＜0.05）。

18、
　　5)與對照組相比，超生理濃度的丙酸睪酮（3×10-6mmol/l、3×10-5mmol/l）可促進gp130的基因轉(zhuǎn)錄（分別平均上調(diào)62.3％、66.2％，P均＜0.01）。
　　6) Chemerin受體、TNFα受體在各個組無明顯變化趨勢。
　　結(jié)論:
　　1) Chemerin與頸動脈病變嚴重程度顯著正相關(guān)，與睪酮水平顯著負相關(guān);
　　2)睪酮可減少內(nèi)皮細胞VCAM-1基因轉(zhuǎn)錄、增加TFPI-1