人類β-防御素在牙髓組織中的免疫組化研究.pdf

1、防御素是植物界以及動物界廣泛存在的一類內(nèi)源性陽離子抗微生物多肽,具有廣泛的殺菌活性、細(xì)胞毒性和免疫趨化作用。其結(jié)構(gòu)富含精氨酸,并含有二硫鍵連接和位置保守的半胱氨酸殘基。人類防御素(human defensins)根據(jù)防御素分子內(nèi)半胱氨酸的位置和連接方式分為兩大類α-防御素和β-防御素(HBD)兩種。研究發(fā)現(xiàn)人類α-防御素主要分布于腸道和子宮陰道中；β-防御素多分布于皮膚、呼吸道上皮和口腔黏膜上皮等部位,作為機體的第一道免疫防線參與機體的

2、免疫防御體系。目前發(fā)現(xiàn)β-防御素有多種亞型,較為人們熟悉的有四種,即HBD-1~HBD-4。最近研究發(fā)現(xiàn)牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞中存在微量的HBD,這提示成牙本質(zhì)細(xì)胞除了參與牙本質(zhì)基質(zhì)的合成外,還可能參與牙髓的免疫防御系統(tǒng)。目前有關(guān)HBD在人牙髓組織中表達與分布、在牙髓組織損傷修復(fù)以及牙髓發(fā)育中的作用的研究報道較少,國內(nèi)亦尚未見報道。本實驗采用免疫組化方法觀察HBD在人牙髓中的定位和分布情況,從而進一步了解該因子在牙髓組織生理、病理狀態(tài)下所起的

3、作用。目的1、研究人類HBD-1和HBD-4在正常、深齲及炎癥牙髓中的表達及其意義。2、觀察在恒牙牙根發(fā)育過程中HBD-1和HBD-4在牙髓中的表達和分布情況,探討HBD-1和HBD-4在恒牙牙根發(fā)育過程中的意義。方法1.采用SP免疫組化染色法,對正常、深齲及牙髓炎各組牙髓組織中的HBD-1和HBD-4兩個因子的表達進行組織學(xué)定位,并通過Image pro-plus 5.1圖象分析軟件對牙髓中的陽性染色進行平均光密度值(optical

4、density, OD)測定。用磷酸緩沖液(phosphatic buffer solution, PBS)代替一抗作為陰性對照。采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對各組數(shù)據(jù)進行相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)分析。2.按恒牙牙根發(fā)育的八個階段,將牙髓組織分為兩組：第1組為根尖孔未閉合組,第2組為根尖孔閉合組。用常規(guī)SP免疫組化法對兩組牙髓進行HBD-1和HBD-4的染色。測定OD值,采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。結(jié)果1、在人牙髓組織

5、中,HBD-1和HBD-4集中表達在牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞的胞核和胞漿中。2、HBD-1在正常、深齲和炎癥組均呈中度陽性表達,三組相互間無顯著差異(P>；0.05)。3、HBD-4在深齲和牙髓炎組中的表達與正常組相比均顯著增強(P<；0.01),且炎癥組較深齲組表達也顯著性增強(P<；0.01)。4、冠髓HBD-1的表達在根尖孔未閉合組呈陽性,與根尖孔閉合組無顯著差異(P>；0.05)。在根尖孔未閉合組,HBD-1在冠部和頸部

6、牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞中成陽性表達,且表達無顯著差異；在根部成牙本質(zhì)細(xì)胞中未見其陽性表達。5、HBD-4在根尖孔未閉合組冠部和頸部牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞突起中呈弱陽性表達,在根部成牙本質(zhì)細(xì)胞突起中見其陽性染色顯著強于冠部和頸部染色。結(jié)論1、HBD-1在牙髓中呈固有性表達,參與了牙髓天然免疫系統(tǒng)的構(gòu)建。2、HBD-4在深齲、牙髓炎癥中表達的變化,提示HBD-4參與深齲、牙髓炎炎癥發(fā)展過程中的免疫防御反應(yīng)。3.HBD-1和HBD-4在人正常發(fā)育的牙髓組