口服長效促胰島素激素在畢赤酵母和大腸桿菌中的表達、檢測及其藥理學活性分析.pdf

1、本文對口服長效促胰島素激素在畢赤酵母和大腸桿菌中的表達、檢測及其藥理學活性進行了分析。本研究通過點突變技術消除了天然GLP-1基因內的DPP-Ⅳ和胰蛋白酶識別位點，rolGLP-1在血液中能夠免受DPP-Ⅳ的降解，而且在腸道中也能抵抗胰蛋白酶的酶解，為其口服和注射制劑的研發(fā)奠定了良好的基礎。在此基礎上，通過分子生物學技術將rolGLP-1基因片段多重正向串聯(lián)重復，將EcoRV和SmaI雙酶切獲得rolGLP-1基因片段利用同尾酶的特性將

2、其克隆到克隆載體pMDGLP-A上，篩選正向連接的轉化子，獲得克隆載體pMDGLP-B(2×GLP)，2×GLP表示兩個rolGLP-1基因正向串連重復的融合基因，反復多次可以獲得不同rolGLP-1拷貝數(shù)的融合基因，然后將其克隆到畢赤酵母表達載體pPIC9、pPIC9K上，分別獲得表達載體pPIC9rolGLP-1、pPIC9KGLP-T(10×GLP)、pPIC9KGLP-U(14×GLP)和pPIC9KGLP-V(18×GLP)。