抑瘤寧體外對非消化系統(tǒng)癌細胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、目的 本課題在前期實驗研究基礎之上以人乳腺癌MDA-MB-231、人肺癌NCI-H520、人肺癌A549、人宮頸癌Hela四種細胞為觀察對象，通過進行細胞形態(tài)學觀察，生長抑制率測定及流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡率進一步探討抑瘤寧對非消化系統(tǒng)癌細胞的增殖抑制作用，最佳方劑組成及用藥劑量，為臨床應用抑瘤寧治療非消化系統(tǒng)實體瘤提供實驗依據(jù)。 方法 1、藥物的制備按照相關(guān)文獻提取方法提取各成分的粗提物。實驗中用培養(yǎng)液將粗

2、提物稀釋成不同濃度。藥物濃度=草藥重量/培養(yǎng)液體積。 2、細胞培養(yǎng)將MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela細胞分別接種于含體積分數(shù)10％滅活胎牛血清的L15、RPMI-1640、F12、高糖DMEM培養(yǎng)液中。在37℃、體積分數(shù)5％CO<,2>、相對濕度為體積分數(shù)95％的細胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。1～2d換液一次，1～2d或2～3d傳代。 3、細胞生長抑制率的測定取MDA-MB-231、NCI-H520、A

3、549、Hela對數(shù)生長期的細胞，分別以1×10<'5>/ml、5x10<'4>/ml、5x10<'4>/ml、5x10<'4>/ml細胞濃度接種于96孔板上，每孔200μ l，培養(yǎng)24h后，以抑瘤寧不同藥物搭配處理細胞為實驗組，每組6個平行孔，設調(diào)零孔，空白對照孔和本底對照孔，置37℃、5％CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，采用噻唑藍(MTT)還原法檢測實驗組細胞生長抑制率。重復實驗3次(n=18)。 4、細胞形態(tài)學觀察倒置顯

4、微鏡下觀察比較實驗組與對照組在細胞形態(tài)學區(qū)別。 5、流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡率6統(tǒng)計學分析采用統(tǒng)計軟件SPSS10．0，采用單因素方差分析及x<'2>檢驗對數(shù)據(jù)進行分析，以α=0．05為檢驗水準。 結(jié)果 1、抑瘤寧對四種非消化系統(tǒng)癌細胞的生長抑制作用 1．1對MDA-MB-231細胞的生長抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Due(0．4mg/ml)+Sol(0．4mg/ml)+Aca(0．4mg/m

5、l)”四藥聯(lián)用時細胞生長抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達99．74％。 1．2對NCI-H520細胞的生長抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Duc(1mg/ml)+Sol(1mg/ml)+Aca(1mg/ml)”四藥聯(lián)用時細胞生長抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達96．41％。 1．3對A549細胞的生長抑制作用以“Rab(3mg/ml)+Duc(0．8mg/ml)+Sol(O．8mg/ml)+Aca(0．8mg

6、/ml)”四藥聯(lián)用時細胞生長抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達80．62％。 1．4對Hela細胞的生長抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Due(1mg/ml)+Sol(1mg/ml)+Aca(1mg/ml)”四藥聯(lián)用時細胞生長抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達97．98％。 2、對照組：MDA-MB-231細胞呈梭形，貼壁生長，細胞透亮，生長狀態(tài)良好。四藥聯(lián)用組：細胞相互分離，貼壁大量減少，細胞皺縮，體積縮小，可

7、見大量細胞崩解碎片，死亡。 3、抑瘤寧作用于體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細胞后，四藥聯(lián)用組s期細胞百分率明顯升高；G<,0>/G<,1>期細胞百分比明顯下降；細胞被阻滯于S期；細胞凋亡率升高。與空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。 結(jié)論 1、Rab、Duc、Sol、Aca四藥聯(lián)用能明顯地抑制MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela細胞的生長。 2、Rab、Due、Sol、