維生素D2對(duì)哮喘大鼠肺組織IL-4及ICAM-1的影響.pdf

1、目的:哮喘是一種由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞及多種細(xì)胞組分參與的慢性氣道炎癥反應(yīng)性疾病,免疫調(diào)節(jié)在哮喘發(fā)病過(guò)程中有重要作用,維生素D在免疫調(diào)節(jié)中的作用越來(lái)越受到重視,研究發(fā)現(xiàn)維生素D對(duì)Th1/Th2平衡有調(diào)節(jié)作用,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)維生素D2對(duì)哮喘大鼠模型進(jìn)行干預(yù),比較各組試驗(yàn)大鼠肺泡灌洗液中IL-4水平、肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)、肺部ICAM-1的表達(dá),探討維生素D在哮喘大鼠的抗炎作用及其可

2、能機(jī)制。
　　方法:按照隨機(jī)分組的原則,將30只SD雄性大鼠隨機(jī)分組成3組,分別為哮喘組、維生素D2組、對(duì)照組,每組10只。(1)哮喘組:于第1、8、15天分別給予無(wú)菌腹腔注射10％ OVA1 ml(內(nèi)含卵蛋白100 mg及氫氧化鋁100 mg)致敏,自第16天開(kāi)始置于密閉霧化罐中用1%OVA霧化吸入激發(fā),持續(xù)霧化1周,每天激發(fā)30分鐘致其出現(xiàn)呼吸急促、喘息或呼吸困難。(2)維生素D2(VD2)組:誘喘方法同哮喘組,從第15天開(kāi)始

3、給予腹腔注射維生素D2[5×105U/(kg.d)],隔天1次,共3次。(3)對(duì)照組:以生理鹽水代替OVA和維生素D2。在末次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)處死大鼠,收集肺組織及肺泡灌洗液(BALF)。將BALF離心后分離上清及沉淀細(xì)胞,并將肺組織經(jīng)脫水透明、石蠟包埋等處理后制作成肺標(biāo)本切片。運(yùn)用Elisa方法對(duì)BALF上清中白細(xì)胞介素4(IL-4)水平進(jìn)行測(cè)定,以及用改良牛氏計(jì)數(shù)臺(tái)對(duì)BALF沉淀細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并將沉淀細(xì)胞涂片染色后進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。運(yùn)用免

4、疫組織化學(xué)方法技術(shù)測(cè)定大鼠肺組織標(biāo)本細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)水平。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)各組指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較。
　　結(jié)果:VD2組IL-4含量(501.54±17.96)pg/ml明顯低于哮喘組(615.37±94.77)pg/ml(P<0.01);VD2組IL-4含量與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VD2組大鼠肺泡灌洗液沉渣中細(xì)胞總數(shù)(72.80±24.44)×106、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(18.20±8.14)×106、嗜酸性粒細(xì)胞

5、計(jì)數(shù)(3.80±1.75)×106明顯低于哮喘組大鼠肺泡灌洗液沉渣中細(xì)胞總數(shù)(108.92±27.55)×106、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(31.30±6.00)×106、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(7.10±2.89)×106(P<0.01);對(duì)照組大鼠肺泡灌洗液沉渣中細(xì)胞總數(shù)(47.20±18.23)×106、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(7.40±1.96)×106、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(0.80±0.79)×106低于VD2組(P<0.01);VD2組肺組織ICAM