膀胱癌組織gp96—肽復合物的純化及抗原肽的生物質譜分析研究.pdf

1、目的：膀胱癌是一種常見的泌尿系惡性腫瘤，目前雖然在早期診斷、手術治療及術后膀胱灌注治療等方面取得了一定的進展，但是，作為一種惡性腫瘤，復發(fā)和轉移仍是其治療的難點。人們試圖采用多方面的綜合治療措施以減少膀胱癌的復發(fā)和轉移，其中，研發(fā)出一種有效的腫瘤疫苗是一個重要的努力方向。從腫瘤組織中純化出gp96-肽復合物作為一種特異性腫瘤疫苗是目前一個研究熱點，其進展相當迅速。不過，雖然從患者癌組織中純化的gp96-肽復合物可作為患者特異性的治療性疫

2、苗，但是，由于組織來源的限制以及純化工序的繁雜，難以進行工業(yè)化生產(chǎn)。目前已證實，在gp96-肽復合物中起腫瘤免疫作用的是抗原肽而不是gp96。因此，針對gp96結合的短肽中特異性抗原肽的分析和鑒定是疫苗研制過程中有待于進一步深入研究的重要問題。這些研究對尋找一種有效的腫瘤肽疫苗和人工化生產(chǎn)gp96-抗原肽復合物疫苗具有積極的意義。我們通過純化膀胱癌組織中的gp96-肽復合物，并測定、分析與gp96結合的多肽的氨基酸序列，為今后制備腫瘤肽

3、疫苗和體外組裝gp96-抗原肽復合物疫苗提供理論基礎。 方法：在第一部分中，利用硫酸銨沉淀法結合親和層析和離子交換層析技術從手術中獲取的10例膀胱癌組織中純化出gp96-肽復合物，利用gp96單克隆抗體和western-blot技術對其進行鑒定并應用BCA法對其濃度進行測定。 在第二部分中，首先利用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜儀測定與gp96結合的多肽的分子量，并利用毛細管電噴霧四極桿飛行時間串聯(lián)質譜儀測定其基酸序列

4、。最后登陸http：//www.expasy.org/tools/blast/查詢多肽的來源。結果：在第一部分中，(1)利用硫酸銨沉淀法結合親和層析和離子交換層析技術可以從膀胱癌組織中純化出gp96-肽復合物，并為western-blot所證實； (2)每克膀胱癌組織可獲得20-40微克的gp96-肽復合物。在第二部分中，(1)與gp96結合的多肽分子量范圍為860.86-3473.05Da之間；(2)測定出其中兩個多肽的氨基酸