膀胱癌特異性導(dǎo)向肽受體蛋白的研究.pdf

1、目的：建立中國(guó)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞系的裸鼠移植瘤模型，并對(duì)膀胱癌導(dǎo)向肽CSNRDARRC與中國(guó)人膀胱癌細(xì)胞系的親和性及特異性進(jìn)行鑒定，同時(shí)分離膀胱癌細(xì)胞與導(dǎo)向肽的結(jié)合蛋白，并對(duì)其進(jìn)行分析鑒定。為將來(lái)臨床上對(duì)膀胱腫瘤進(jìn)行早期診斷、降低腫瘤術(shù)后殘留率和靶向治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：將Matrigel基質(zhì)膠作為中國(guó)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞的懸浮劑，用注射器將癌細(xì)胞種植于裸鼠背側(cè)皮下建立裸鼠移植瘤模型。通過(guò)化學(xué)方法合成多肽片

2、段CSNRDARRC并對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記，利用流式細(xì)胞技術(shù)及免疫組化技術(shù)，對(duì)導(dǎo)向肽與腫瘤細(xì)胞及腫瘤組織的親和性及特異性進(jìn)行鑒定。利用免疫親和層析技術(shù)對(duì)導(dǎo)向肽的結(jié)合蛋白進(jìn)行分離，并利用western blot和質(zhì)譜分析技術(shù)對(duì)分離所得蛋白進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型。
　　2、流式細(xì)胞技術(shù)及激光共聚焦顯微鏡技術(shù)在細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示：小分子熒光探針FITC-CSNRDARRC與中國(guó)人膀胱癌細(xì)胞B

3、IU-87的親和性明顯高于人肝癌細(xì)胞Hep-G2、人前列腺癌細(xì)胞PC-3、人宮頸癌細(xì)胞Siha和人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U-87。免疫組化實(shí)驗(yàn)表明：該導(dǎo)向肽能特異性地與腫瘤組織結(jié)合，而與正常組織幾乎沒有結(jié)合能力。
　　3、免疫親和層析成功分離該導(dǎo)向肽的結(jié)合蛋白，對(duì)分離蛋白進(jìn)行的western blot實(shí)驗(yàn)表明，該蛋白為導(dǎo)向肽的受體蛋白。質(zhì)譜分析結(jié)果顯示該受體蛋白可能為HSP90蛋白。
　　結(jié)論：
　　1.導(dǎo)向肽片段CSNRDARR