哺乳藏豬腸道小肽及氨基酸轉(zhuǎn)運載體mRNA表達的組織特異性和發(fā)育性變化的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是三大主要營養(yǎng)素之一，對動物的生長發(fā)育和新陳代謝起著至關(guān)重要的作用，小肽和游離氨基酸是蛋白質(zhì)消化產(chǎn)物的主要形式，其中2-3個氨基酸組成的小肽的吸收是通過腸道上皮細胞上H+驅(qū)動小肽轉(zhuǎn)運載體完成的，而游離氨基酸的吸收是通過腸上皮細胞上大量氨基酸轉(zhuǎn)運載體實現(xiàn)的。本文意在探討藏豬腸道小肽和氨基酸轉(zhuǎn)運載體的組織分布以及發(fā)育性表達，為此,開展了①藏豬小肽轉(zhuǎn)運載體PepT1 cDNA克隆，②藏豬哺乳階段腸道小肽轉(zhuǎn)運載體Pept1、酸性氨基酸轉(zhuǎn)運

2、載體EAAC1和堿性氨基酸轉(zhuǎn)運載體CAT1 mRNA的組織特異性，③藏豬哺乳階段腸道不同部位EAAC1、CAT1以及PepT1 mRNA表達的發(fā)育性變化研究。 試驗①：選取28日齡哺乳仔藏豬6頭，以空腸中段為組織樣本，運用RT-PCR技術(shù)對藏豬腸道小肽轉(zhuǎn)運載體PepT1 cDNA進行了克隆。結(jié)果表明，首次成功克隆了藏豬小肽轉(zhuǎn)運載體PepT1 cDNA的編碼區(qū)，全長2127bp，Genbank基因序列號為：EU400159，預(yù)測該

3、轉(zhuǎn)運載體蛋白由708氨基酸組成。通過TMHMM軟件對PepT1蛋白二級結(jié)構(gòu)進行預(yù)測顯示Pept1具有典型的膜蛋白結(jié)構(gòu)，共有13個跨膜結(jié)構(gòu)域，其中第10和11跨膜結(jié)構(gòu)之間存在一個大的胞外環(huán)。 試驗②：選取體重接近并且健康的28日齡哺乳仔藏豬6頭，屠宰后分離腸道（十二指腸、空腸前段、空腸后段和回腸），運用Real-Time PCR技術(shù)對藏豬不同腸段小肽轉(zhuǎn)運載體PepT1，酸性氨基酸轉(zhuǎn)運載體EAAC1和堿性氨基酸轉(zhuǎn)運載體CAT1 mR

4、NA的組織分布進行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1）空腸后段PepT1 mRNA表達豐度最高，顯著高于十二指腸、空腸前段和回腸（P<0.05）；回腸PepT1 mRNA表達量最低，但與空腸前段以及十二指腸腸的差異不顯著(P>0.05)；2）從小腸近端到遠端EAAC1 mRNA的表達豐度在小腸的表達呈升高趨勢，即回腸表達最高，顯著高于空腸前、后段和十二指腸（P<0.05）；空腸后段次之，但與十二指腸、空腸前段差異不顯著（P>0.05）；3）不同腸段CA

5、T1 mRNA表達格局與EAAC1相似，回腸中CAT1mRNA表達豐度最高，顯著高于十二指腸（P<0.05）；空腸前、后段差異不顯著（P>0.05）。 試驗③：選取體重接近并且健康的哺乳仔藏豬30頭，即1、7、14、21和28日齡各6頭，運用實時定量PCR對PepT1、EAAC1、CAT1 mRNA表達的發(fā)育性變化進行了研究。結(jié)果表明，藏豬EAAC1、CAT1、PepT1 mRNA表達的發(fā)育性變化在十二指腸、空腸和回腸都有較大差

6、異。其中十二指腸中CAT1、PepT1 mRNA表達的發(fā)育性變化相似，1-14日齡呈上升趨勢并在14日齡達到最大值，21、28日齡均有所降低。1、7日齡EAAC1mRNA表達量顯著大于14、21和28日齡；空腸中EAAC1、CAT1mRNA表達的發(fā)育性變化相似，1-14日齡呈上升趨勢，21日齡顯著下降，28日齡回升，1-21日齡PepT1 mRNA表達豐度呈遞增趨勢，28日齡略有下降?；啬c中PepT1與EAAC1mRNA表達豐度具有相似

7、的發(fā)育性變化，7日齡PepT1和EAAC1mRNA表達量均達到最大，14日齡顯著降低，21日齡顯著上升，28日齡略有下降。1-14日齡回腸CAT1 mRNA的表達豐度呈遞增趨勢，接著在21日齡顯著下降，到28日齡反轉(zhuǎn)顯著增加并達到最高點。 總體而言，哺乳仔藏豬不同腸道PepT1、EAAC1、CAT1mRNA的表達具有組織特異性，同一轉(zhuǎn)運載體mRNA在不同腸段表達的發(fā)育性變化有所不同，同一腸段不同轉(zhuǎn)運載體mRNA表達的發(fā)育性變化也有