奶牛消化道內(nèi)肽結(jié)合氨基酸的數(shù)量分布及其轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)的研究.pdf

1、十二指腸作為非腸系膜系統(tǒng)的成員之一，也屬于小腸的組成部分之一，其生成和吸收SNAN的能力對乳蛋白前體物的生成至關(guān)重要。至今，還沒有將瘤胃、瓣胃和十二指腸對小肽和游離氨基酸的生成和吸收能力進(jìn)行比較的試驗研究。為此，本文針對瘤胃、瓣胃和十二指腸內(nèi)的FAA-N和PBAA-N的含量及各部位粘膜上皮的APN、FAA轉(zhuǎn)運(yùn)載體和小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepT1的相對表達(dá)量進(jìn)行了研究，初步闡明了乳蛋白前體物生成和吸收的主要部位。主要試驗結(jié)果如下:
　　試驗

2、一:為探索瘤胃、瓣胃和十二指腸中肽結(jié)合氨基酸和游離氨基酸濃度的分布。本試驗將6頭荷斯坦泌乳奶牛作為試驗對象，采取瘤胃、瓣胃和十二指腸內(nèi)的食糜經(jīng)離心預(yù)處理為澄清液體后，用氨基酸自動分析儀測定6N HCl水解前后的游離氨基酸(FAA)和總氨基酸濃度。試驗結(jié)果為，除了脯氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指腸內(nèi)的差異不顯著外(P＞0.05)，其余FAA-N均為十二指腸中的濃度顯著高于瘤胃和瓣胃中的濃度(P＜0.01)。所有FAA-N在瘤胃內(nèi)的濃度均略低于在

3、瓣胃內(nèi)的濃度。肽結(jié)合苯丙氨酸、肽結(jié)合組氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指腸內(nèi)的濃度差異不顯著(P＞0.05)，其余PBAA-N在十二指腸內(nèi)的濃度顯著高于瘤胃、瓣胃(P＜0.01)。瓣胃內(nèi)PBAA-N均略高于瘤胃內(nèi)的濃度，且顯著低于十二指腸內(nèi)的濃度(P＜0.01)。試驗結(jié)果表明，F(xiàn)AA-N和PBAA-N在瘤胃和瓣胃內(nèi)的濃度顯著低于其各自在十二指腸內(nèi)的濃度，說明FAA-N和PBAA-N在十二指腸中的生成量較高。
　　試驗二:為探索瘤胃、瓣胃和十

4、二指腸中小肽和游離氨基酸吸收的主要部位，本試驗將6頭荷斯坦泌乳奶牛作為試驗對象，采取瘤胃、瓣胃和十二指腸粘膜上皮組織，提取mRNA后應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR測定氨基肽酶N(APN)、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體（ASCT2、y+LAT1、ATB0,+）和小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepT1的表達(dá)量。設(shè)計適合奶牛的APN、FAA轉(zhuǎn)運(yùn)載體的引物并檢驗其擴(kuò)增效率，引用已經(jīng)設(shè)計并驗證過的PepT1載體引物。應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR儀測定各基因的相對表達(dá)量。APN、FAA轉(zhuǎn)運(yùn)載

5、體經(jīng)驗證擴(kuò)增效率依次為，其可以用于實(shí)時熒光定量檢測基因的相對表達(dá)量。除了APN在瘤胃的表達(dá)量顯著高于瓣胃和十二指腸外(P＜0.05)，ASCT2、y+LAT1、ATB0,+的表達(dá)量均為十二指腸顯著高于瘤胃和瓣胃(P＜0.05)。PepT1的表達(dá)量從瘤胃到十二指腸依次升高，且十二指腸的表達(dá)量顯著高于瘤胃和瓣胃的表達(dá)量(P＜0.05)。試驗結(jié)果表明，在小肽的降解過程中，相比于十二指腸和瓣胃，瘤胃上皮細(xì)胞的APN降解能力可能更強(qiáng);而氨基酸和小