腎上腺結(jié)節(jié)功能與結(jié)構(gòu)的初步研究.pdf

1、目的與基本方法：為了明確腎上腺結(jié)節(jié)的結(jié)構(gòu)、功能及探討其與腎上腺疾病的相關(guān)性，我們采用免疫組化及電鏡標本生物體視學(xué)觀察的方法，通過對正常腎上腺組織、腎上腺結(jié)節(jié)及腎上腺皮質(zhì)腺瘤的3β-羥基類固醇脫氫酶(3β-HSD)免疫組化染色、電鏡標本的制作，比較其細胞染色的陽性率及細胞脂肪顆粒的體積密度(VV)、表面積密度(SV)、數(shù)密度(NV)，試圖證明腎上腺結(jié)節(jié)與腎上腺疾病的相關(guān)性較低，從而為術(shù)前選擇合適的患者奠定基礎(chǔ)。 對象與具體方法：

2、 1、對象： 2000年1月-2007年12月間。腎上腺標本60例。其中包含20例電鏡標本。40例石蠟包埋組織塊。最后診斷為皮質(zhì)增生與皮質(zhì)腺瘤各20例，正常腎上腺(腎移植尸體供腎時收集)20例。 2、方法： 2.13β-羥基類固醇脫氫酶(3β-HSD)的免疫組化標本的制備： 標本經(jīng)10％福爾馬林固定18-24小時，常規(guī)石蠟包埋，于腎上腺外周曲線明顯扭曲處做連續(xù)切片，每張切片厚5um。1張作HE染色，

3、1張作3β-羥基類固醇脫氫酶(3β-HSD)免疫組化染色。 2.2電鏡切片的制備： 將手術(shù)取出的腎上腺置于已預(yù)冷的操作臺上，觀察腎上腺大體結(jié)構(gòu)，于腎上腺外周曲線明顯扭曲處不同部位隨機取3塊組織，大小約0.5-1.0mm3，固定、脫水、浸透、包埋后，用LKBNova型超薄切片機切片，染色后用JEM-100CX型透視電鏡進行觀察。每張切片拍攝照片3張，要求隨機拍攝。 2.3電鏡切片測量方法：使用電鏡室測試網(wǎng)，大小為8

4、0mm×120mm，點間距(每小格長度)為5mm，測試網(wǎng)共有352個測試點，測試線總長為1760mm。測試時將測試網(wǎng)覆蓋在電鏡照片上，測試內(nèi)容以脂肪顆粒為參照系。按計算公式計算測試脂肪顆粒的密度參數(shù)：體積密度(VV)、表面積密度(SV)、數(shù)密度(NV)。 2.4實驗分組： (1)對照組：正常腎上腺20例(已包埋組織，作HE及免疫組化染色)。 (2)腎上腺增生組：20例免疫組化染色，包含10例電鏡標本。 (

5、3)腎上腺皮質(zhì)腺瘤組：20例免疫組化染色，包含10例電鏡標本。 3、統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.5軟件系統(tǒng)分析，所有計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，比較采用單向方差分析及兩獨立樣本的t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、腎上腺結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)：(1)大體結(jié)構(gòu)：腎上腺結(jié)節(jié)一般在切開腺體之前就能發(fā)現(xiàn)。結(jié)節(jié)多出現(xiàn)在包膜表面，扭曲了。腎上腺原本平滑的外周曲線；(2)光鏡下結(jié)構(gòu)：結(jié)節(jié)性增生的部位束狀帶明顯增

6、厚，部分標本網(wǎng)狀帶也有不同程度的增厚；(3)電鏡下結(jié)構(gòu)：結(jié)節(jié)樣增生最明顯的細胞形態(tài)的特征是大的、蒼白色脂粒占據(jù)細胞內(nèi)的大部分空間。脂粒壓迫線粒體和細胞核。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)幾乎全部消失，而高爾基體則幾乎沒有。 2、3β-HSD免疫組化：睪丸組織作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。陽性物均位于胞漿內(nèi)，呈棕黃色。判斷標準是陽性細胞數(shù)占細胞總數(shù)的百分比。比較腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)增生、皮質(zhì)腺瘤和正常腎上腺等不同病例皮質(zhì)3β-HSD染色陽性細胞占細胞

7、總數(shù)百分比之間的差異。 腎上腺皮質(zhì)腺瘤、皮質(zhì)結(jié)節(jié)性增生和正常腎上腺中均可見3β-HSD染色陽性細胞，其中腎上腺皮質(zhì)腺瘤染色陽性細胞百分比為36.8％，皮質(zhì)結(jié)節(jié)性增生和正常。腎上腺染色陽性細胞百分比分別為11.7％及13.6％，各組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，結(jié)節(jié)性增生組與正常腎上腺組間的細胞陽性率也存在差異。 3、電鏡切片分析： 3.1透視電鏡下細胞形態(tài)學(xué)結(jié)節(jié)樣增生最明顯的細胞形態(tài)的特征是大的、蒼白色脂粒

8、占據(jù)細胞內(nèi)的大部分空間。脂粒壓迫線粒體和細胞核。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)幾乎全部消失，而高爾基體則幾乎沒有。 腺瘤細胞的最明顯的特征是大量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，線粒體的出現(xiàn)還有少量脂粒。在束狀帶和網(wǎng)狀帶的細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的數(shù)量都大于普通細胞。在束狀帶是粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量多，而在網(wǎng)狀帶則相反，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的數(shù)量明顯多于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。高爾基體也較普通的皮質(zhì)細胞顯著增高。 3.2兩組細胞脂肪顆粒視學(xué)參數(shù)變化結(jié)節(jié)增生組與腺瘤組相比，VV，SV，NV均小于腺瘤組，差異有顯著

9、意義。 結(jié)論： 1、根據(jù)3β-HSD結(jié)果，腎上腺結(jié)節(jié)與正常腎上腺的功能相近，與腎上腺疾病的相關(guān)性較低。腎上腺腺瘤的功能則明顯異常，為許多腎上腺疾病的病因。這也解釋了為什么臨床上腎上腺腺瘤的手術(shù)效果很好，而許多腎上腺結(jié)節(jié)的患者術(shù)后仍存在高血壓等癥狀。 2、根據(jù)電鏡切片分析，結(jié)節(jié)細胞內(nèi)脂肪顆粒明顯增多，呈現(xiàn)退行性變。而皮質(zhì)腺瘤細胞內(nèi)高爾基體、線粒體等細胞器明顯較多，脂肪顆粒較少。再次說明腎上腺結(jié)節(jié)與腎上腺疾病的相關(guān)性