多肽介導(dǎo)的明膠-硅氧烷納米?？缪X屏障實驗研究.pdf

1、腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及其之間豐富的緊密連接在血腦屏障的構(gòu)成起了關(guān)鍵作用，并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的維持中極為重要，但是，血腦屏障的存在也阻止了許多診斷、治療制劑轉(zhuǎn)運入中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織內(nèi)，成為入腦轉(zhuǎn)運難以克服的障礙。據(jù)研究，有98％的小分子及全部的大分子診斷、治療制劑被限制轉(zhuǎn)運到腦實質(zhì)組織內(nèi)。因此，近年來研究者使用了各種各樣的方法嘗試去克服這一難題，特別是多功能藥物遞送系統(tǒng)備受矚目。納米粒子在腦部藥物遞送系統(tǒng)的應(yīng)用中具有廣闊的前景，已在腫

2、瘤診斷、藥物轉(zhuǎn)運及靶向治療方面顯示出巨大優(yōu)勢。無機明膠-硅氧烷納米粒子已被驗證具有良好的包載及釋放DNA的性能。
　　 本研究，首先通過兩步溶膠-凝膠法，合成了明膠-硅氧烷納米粒子(GS NPs)，之后通過表面修飾連接上親水性聚乙二醇(PEG)和陽離子多肽SynB或Tat。探討經(jīng)PEG及SynB、Tat修飾后其體內(nèi)、外跨血腦屏障的性能，為該納米粒子作為入腦轉(zhuǎn)運載體的應(yīng)用提供理論和實踐支持。
　　 第一部分，為克服納米粒子

3、在體內(nèi)易被單核吞噬系統(tǒng)清除及不易跨過血腦屏障入腦的特點，我們以明膠、GPSM、APTMS通過兩步溶膠-凝膠法制備了明膠-硅氧烷納米粒子(GS NPs)，表面經(jīng)PEG及SynB或Tat修飾，制備了一具有跨血腦屏障、逃逸單核巨噬系統(tǒng)吞噬的多功能納米顆粒，并經(jīng)Zeta電位儀、粒徑儀和透射電鏡對其進(jìn)行理化性能分析；
　　 第二部分，通過分次過濾、膠原酶消化、密度梯度離心等方法，從SD乳鼠腦皮質(zhì)成功提取、培養(yǎng)出腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCEC)和

4、腦星型膠質(zhì)細(xì)胞(AC)并經(jīng)免疫熒光法鑒定純度分別達(dá)到97%和98%。繼而，使用BCEC和AC構(gòu)建了接觸共培養(yǎng)體外BBB模型，并通過激光共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡、酶標(biāo)儀等對其形態(tài)、解剖及功能進(jìn)行評價，為納米粒子體外跨BBB實驗構(gòu)建堅實的研究基礎(chǔ)；
　　 第三部分，通過MTT實驗考察了納米粒子對BCEC的生物相容性。根據(jù)MTT實驗結(jié)果選擇合適劑量納米粒子，以BCEC和體外BBB模型為實驗平臺，通過激光共聚焦顯微鏡、電感耦合等離子體質(zhì)