BAT3介導(dǎo)的YWK-Ⅱ蛋白-APLP2穩(wěn)定性增加與腫瘤發(fā)生的關(guān)系及Nrdp1s的功能初步研究.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院)博士學(xué)位論文BAT3介導(dǎo)的YWKⅡ蛋白APLP2穩(wěn)定性增加與腫瘤發(fā)生的關(guān)系及Nrdp1s的功能初步研究姓名：吳為申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王琳芳；繆時英200907北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生論文眾所周知，泛素蛋白酶體途徑和吞噬溶酶體途徑是體內(nèi)負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)降解的兩條主要途徑，令人好奇的是YWKⅡ蛋白／AlPLP2究竟通過哪條途徑被降解BAT3如何抑制這種降解本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用蛋白酶體抑

2、制劑MGl32或溶酶體抑制劑氯喹處理細(xì)胞后，YWKII蛋白腳LP2的蛋白水平顯著提高。CHX追蹤實驗表明MGl32和氯喹均顯著增強(qiáng)YWKII蛋白，APLP2的穩(wěn)定性，這些結(jié)果表明體內(nèi)YWKII蛋白／APLP2同時被泛素蛋白酶體途徑和吞噬溶酶體途徑這兩條途徑所降解。與此同時，本研究發(fā)現(xiàn)MGl32處理細(xì)胞后體內(nèi)YWKII蛋白／|APLP2泛素化增加，而且rem實驗也證實MGl32可以增加YWKII蛋白／APLP2泛素化，這些結(jié)果證實體內(nèi)存在

3、泛素化形式的YWK一Ⅱ蛋白／APLP2。當(dāng)外源表達(dá)BAT3時，以泛素化形式存在的YWKⅡ蛋白／APLP2明顯減少。因此我們的結(jié)果證實BAT3可以通過抑制YWKII蛋白／APLP2的泛素化而減少YWKII蛋白／APLP2的降解，增加YWK—II蛋白／APLP2的穩(wěn)定性，提高YWKII蛋白腳LP2蛋白水平。本室前期工作中發(fā)現(xiàn)YWKII蛋白／APLP2參與調(diào)控細(xì)胞生長以及凋亡過程。本研究運用RealtilllePCR和Westemblonin

4、g方法比較了正常胰腺組織以及五株胰腺癌細(xì)胞中YWKII蛋白腳LP2m】剛A及蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，五株胰腺癌細(xì)胞中YWKII蛋白／APLP2mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)均較正常胰腺組織高。此外，應(yīng)用組織芯片技術(shù)驗證了YWKII蛋白／APLP2蛋白在胰腺癌組織中表達(dá)水平比正常胰腺組織蛋白水平明顯增強(qiáng)。這些結(jié)果提示YWKII蛋白／APLP2蛋白可能參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。在本研究中，通過將表達(dá)YWKII蛋白／APLP2IⅢAi的慢病毒感染

5、胰腺癌ASPC—l細(xì)胞和結(jié)腸癌HCTll6細(xì)胞，成功構(gòu)建YWKⅡ蛋白／APLP2消減的穩(wěn)定細(xì)胞株。我們發(fā)現(xiàn)用UV照射細(xì)胞后，檢測凋亡標(biāo)記分子caSpase3和P_6舢，結(jié)果顯示與對照組相比，YwKII蛋白，APLP2砌qAi組細(xì)胞切割的caSp硒e3和PARP都明顯增多，提示YWKII蛋白／APLP2被消減后可以增加細(xì)胞對凋亡的敏感性。而本室前期工作同時表明過表達(dá)YWKII蛋白／APLP2可以抑制CHX誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果提示YWK

6、II蛋白／APLP2可能通過抑制細(xì)胞凋亡而參與腫瘤發(fā)生。我們應(yīng)用凋亡誘導(dǎo)劑CPT刺激HCTll6細(xì)胞或小鼠精原細(xì)胞GC1，發(fā)現(xiàn)YWKII蛋白／APLP2隨著凋亡的進(jìn)行先升高后降低。與對照組相比，過表BAT3可以明顯提高YWKⅡ蛋白／APLP2在凋亡過程中的表達(dá)，這些結(jié)果提示在凋亡早期階段，YWKⅡ蛋白腳LP2表達(dá)增高可作為體內(nèi)的一種拮抗凋亡、自我保護(hù)的途徑?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，我們感興趣的是BAr3在人體內(nèi)腫瘤發(fā)生過程中是否也能介導(dǎo)相似的