烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型的研究.pdf

1、肺癌是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤,近年來發(fā)病率及死亡率逐年上升。肺癌動物模型對肺癌的發(fā)病機理研究及治療藥物篩選非常重要,但目前常用的肺癌模型中移植性腫瘤長勢過快,與臨床腫瘤差異很大;自發(fā)性與誘導(dǎo)性腫瘤發(fā)病率和成瘤時間很不穩(wěn)定。因此,建立一種與臨床肺癌生物學(xué)特征相似、致瘤穩(wěn)定均一、重現(xiàn)性好、發(fā)病率高的肺癌動物模型對于研究肺癌的病因及篩選肺癌治療藥物,尤其是篩選十分有特色的肺癌治療傳統(tǒng)中藥是腫瘤領(lǐng)域的迫切需要。
　　本研究采用不同

2、劑量烏拉坦、不同品系小鼠及不同致癌方案比較肺致癌率及平均肺結(jié)節(jié)數(shù)以確定最佳肺癌造模方法;通過生化指標檢測及病理組織分析比較烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型與臨床人體肺癌發(fā)病的相似性;并通過寒熱2種性質(zhì)的中藥對建立的肺癌模型進行佐證,提出肺癌新的發(fā)病機制,以期為臨床肺癌的治療提供新理念、新方法。
　　在本研究中,烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可在C57BL/6小鼠中4個月誘導(dǎo)出穩(wěn)定均一、致癌率100％的肺腺癌,并能

3、克服C57BL/6小鼠對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌的基因抵抗。肺癌小鼠體內(nèi)生化指標檢測表明,該模型建立后荷瘤小鼠ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、TrkA、BDNF、TrkB、TGF-β1、bFGF、Ins、Glut-4水平均顯著升高,肺組織LN、血清TC水平顯著降低,且隨著時間的延長與正常小鼠差異越顯著。病理及免疫組化檢測表明,該模型中誘導(dǎo)的小鼠肺癌符合臨床中分化肺腺癌特征,表現(xiàn)為完整的腺囊結(jié)構(gòu)、侵潤性較低、部分瘤細胞充滿囊腔,免疫組化

4、TTF-1(+)、CEA(+)、P63(-)。在模型建立過程中,小鼠逐漸畏寒喜暖、蜷縮少動、尾部及耳廓血管暗紫、體溫下降、ATP酶及LDH活性降低、全血粘度及紅細胞聚集指數(shù)升高、微循環(huán)障礙等,表現(xiàn)出寒凝血瘀的中醫(yī)學(xué)體征。溫熱藥附子可減弱寒凝血瘀體征及不同程度改善肺組織中ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、BDNF、TGF-β1、LN異常水平,阻止腫瘤進程;寒涼藥蒲公英加重寒凝血瘀體征,有促進腫瘤進展的趨勢。
　　為了驗證拓

5、展腫瘤的惡熱喜寒特性,我們用烏拉坦400μg/ml處理人正常肝L02細胞建立轉(zhuǎn)化細胞系,該轉(zhuǎn)化細胞能在軟瓊脂上形成集落,線粒體數(shù)量增多,具有腫瘤細胞的一些惡性特質(zhì)。明膠電泳及western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)化細胞內(nèi)MMP-9及TGF-β1表達明顯多于正常細胞。另外,我們發(fā)現(xiàn),與37℃比較,32℃培養(yǎng)能提高烏拉坦對L02細胞的轉(zhuǎn)化率。
　　綜上所述,烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可建立致瘤穩(wěn)定均一、重