IDO基因轉(zhuǎn)染小鼠Lewis肺癌細胞誘導(dǎo)Treg細胞增殖的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文IDO基因轉(zhuǎn)染小鼠Lewis肺癌細胞誘導(dǎo)Treg細胞增殖的實驗研究姓名：謝啟超申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導(dǎo)教師：陳正堂20080501第三軍醫(yī)大學博士學位論文細胞，同時設(shè)置空白對照組(Lewis細胞)及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(LewisEGFP細胞)，利用transwell侵襲小室，檢測三種細胞在形態(tài)學和侵襲力等生物學行為方面的區(qū)別；再將Lewis—IDO、Lewis—EGFP和Lewis肺癌細胞分別與小鼠T淋巴細胞

2、混合培養(yǎng)，利用流式細胞技術(shù)分析三種細胞對Treg細胞的誘導(dǎo)增殖作用；最后將三種細胞分別種植到C57小鼠，檢測小鼠外周血和種植瘤中Treg細胞的增殖、種植瘤和轉(zhuǎn)移灶的形成，1一MT通過加入小鼠飲用水中的方式發(fā)揮作用，通過對小鼠種植瘤內(nèi)IDO基因表達和Treg細胞增殖檢測驗證對腫瘤局部免疫耐受的調(diào)控作用。結(jié)果：1、肺癌組織、瘤周正常肺組織和肺良性病變組織中IDO表達陽性率分別為677％(42／62)、O和133％(2／15)，前者與后二者比

3、較有顯著統(tǒng)計學差異(Po05)，ID0陽性表達率與Treg細胞陽性率之間具有非常顯著相關(guān)性(PO01)。2、IDO基因成功轉(zhuǎn)染到小鼠Lewis肺癌細胞，與Lewis—EGFP細胞和Lewis細胞相比，Lewis—ID0細胞貼壁比例增加，形態(tài)變?yōu)殚L梭形，偽足明顯增多延長，前二者形態(tài)相似；Lewis—IDO細胞侵襲能力增強，破壞matrigel基質(zhì)蛋白膠層進入下室內(nèi)的細胞數(shù)明顯增多，Lewis—ID0、Lewis—EGFP及Lewis細胞分

4、別為2374221、166O142和1856195，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計學意義(P005)；Lewis—IDO細胞與小鼠T淋巴細胞共培養(yǎng)后，Treg細胞增殖明顯，與Lewis—EGFP細胞(62O36)％vs(50052)％，)及Lewis細胞(62036)％vs(4904)％相比統(tǒng)計學差異顯著(PO05)。3、15只種植Lewis—IDO細胞的小鼠發(fā)生肝肺轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)量及轉(zhuǎn)移灶為12只和44個轉(zhuǎn)移灶，種植Lewis—EGFP及

5、Lewis細胞的小鼠分別為5只7個轉(zhuǎn)移灶及4只7個轉(zhuǎn)移灶，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計學意義(P=O01)；流式分析結(jié)果表明，種植Lewis—IDO細胞的小鼠外周血中Treg細胞比例明顯高于Lewis—EGFP細胞組和Lewis細胞組，其比例分別為(13745)％、(8933)％和(9234)％，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計學差異(尸005)；從平均存活時間來看，種植Lewis—IDO、Lewis—EGFP和Lewis細胞的小鼠平均存活