阿奇霉素誘導小鼠急性肝損傷模型的建立及其分子病理的研究.pdf

1、目的：建立阿奇霉素誘導的小鼠急性肝損傷模型并研究急性肝損傷過程中相關分子的動態(tài)變化，從而探討其作用的可能機制。
　　方法：取小鼠300只，每100只為一組，共分三組，每組中有90只給予0.3％阿奇霉素溶液200mg.kg-1、400mg.kg-1、800mg.kg-1腹腔注射，建立小鼠急性肝損傷模型，剩余10只為對照組，在注射阿奇霉素后0h、3h、6h、12h、24h、30h、36h、42h、48h和54h10個時間點取材，每個時

2、間點取10只小鼠，利用賴氏法檢測血清丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）的活性變化；同時利用HE染色的方法檢測各時間點小鼠肝組織的病理變化；利用蛋白印跡的方法檢測各時間點小鼠肝組織中PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF等分子的表達變化，用Gel Pro4.0軟件計算蛋白相對表

3、達值。
　　結果：與正常對照組小鼠相比較，200mg/kg阿奇霉素模型組小鼠血清ALT和AST活性變化不明顯；400mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性于12h明顯升高，24h逐漸降低并于54h時恢復正常；800mg/kg阿奇霉素模型組其ALT、AST活性均呈顯著升高(P<0.05)，在24h可達高峰，于30h開始降低，54h時可恢復至正常。200、400mg/kg阿奇霉素注射后小鼠肝臟組織學變化不明顯；800mg/kg阿

4、奇霉素注射，肝受到一定損傷之后，小鼠的肝臟失去正常結構，組織病理學結果顯示注射阿奇霉素后24h肝組織損傷最為嚴重，然后開始逐漸恢復，于54h可恢復至正常。阿奇霉素所誘導的小鼠急性肝損傷在3h，6h，12h，24h，30h，36h，42h，48h，54h之后肝PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP27、TNF-α、VEGF蛋白的表達均可出現(xiàn)顯著的變化趨勢(P<0.05)。PCNA在阿奇霉素誘導后6h至30h明顯降低，36h時開始

5、升高，42h又有所下降，隨后又升高，54h又降低； Bcl-2在阿奇霉素誘導后明顯降低，在6h時達最低點，然后于30h開始升高，到36h和42h其表達又降低；Bax在阿奇霉素誘導后3h到6h逐漸升高，在12h達到高峰，然后降低，并逐漸向正常水平恢復。HSP27在阿奇霉素誘導后3h到6h開始升高，然后降低，在30h降至最低，隨后逐漸恢復至正常；HSP70在阿奇霉素誘導后3h至12h先升高，24h時降低，并逐漸恢復至正常; TNF-α在阿奇

6、霉素誘導后先逐漸升高，30h達到高峰，然后又逐漸降低， TNF-α致細胞膜的通透性增加，從而大量分泌，但因其高度的表達，可加重肝的損傷程度，因而后期又有逐漸降低趨勢；VEGF在阿奇霉素誘導后于24h逐漸升高，30h達最高，于36h開始下降，48h逐漸向正常水平恢復。
　　結論：⑴利用800mg/kg阿奇霉素注射小鼠成功建立小鼠急性肝損傷動物模型。⑵阿奇霉素誘導小鼠急性肝損傷后肝組織PCNA、Bcl-2、Bax、HSP70、HSP2