烏司他丁對(duì)膿毒癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-26與STAT-1-3影響的研究.pdf

1、目的：⑴了解烏司他丁對(duì)膿毒癥患者PBMCs中IL—26與STAT-1/3的mRNA表達(dá)量的變化以及臨床意義。⑵了解烏司他丁對(duì)膿毒癥患者外周血血清中IL—26的蛋白含量的變化及臨床意義。 方法：本研究于2008年6月至2009年3月收集來(lái)自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院普內(nèi)科、CCU、MICU診斷符合1991年ACCP/SCCM聯(lián)合倡儀提出的SIRS標(biāo)準(zhǔn)和1995年10月廬山全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議制訂的膿毒癥和MODS病情分期診斷標(biāo)準(zhǔn)的

2、膿毒癥患者25例。首次于確診6小時(shí)內(nèi)采血，每次采血4mL，2mL立即注入含有無(wú)肝素的5mL無(wú)菌核酸離心管，用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞與血小板后分離出PBMCs后，置于RNA穩(wěn)定劑穩(wěn)定RNA，并于—80℃冰凍保存，用于檢測(cè)mRNA。另2mL置于5mL無(wú)肝素離心管，離心后抽取血清，—80℃冰凍用于蛋白檢測(cè)。第24小時(shí)、第48小時(shí)、第120小時(shí)采血同上。所有采血過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌操作。用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)相應(yīng)血清中TNF—α、IL

3、—26的蛋白含量。采用用以cDNA為內(nèi)參標(biāo)的逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈(Reverse Transciption Polymerase Chain Reaction，RT—PCR)方法檢測(cè)STAT-1/3、TNF—α、IL—26 mRNA相對(duì)表達(dá)量：提取總RNA；分別加STAT-1/3、TNF—α、IL—26及參比基因TBP引物，RT—PCR；并通過(guò)real time PCR檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，最終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用

4、比較Ct法進(jìn)行相對(duì)定量。求出各基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果：①膿毒癥患者IL—26的變化：膿毒癥患者的PBMCs中IL—26mRNA表達(dá)量于入院時(shí)UTI組、NAT組、DEA組三組間無(wú)顯著差異(P均>0.05)；24小時(shí)UTI組(1.8760±0.7193)顯著高于NAT組(0.7533±0.2908)和DEA組(0.6452±0.0607)(P均<0.05)；48小時(shí)UTI組(1.5308±0.3904)顯著高于NAT組(0

5、.8958±0.3671)和DEA組(0.6042±0.5407)(P均<0.05)；120小時(shí)UTI組(1.1679±0.2625)顯著高于NAT組(0.6994±0.2746)和DEA組(0.5343±0.0765)(P均<0.05)；而24小時(shí)、48小時(shí)和120小時(shí)DEA組與NAT組無(wú)顯著差異(P均>0.05)。②膿毒癥和MODS患者PBMCs STAT-1/3 mRNA表達(dá)量的變化： STAT-1mRNA表達(dá)量于24小時(shí)NAT組

6、(3.9732±3.3100)明顯高于UTI組(2.7580±2.2603)和DEA組(3.3857±0.1736)，但48小時(shí)時(shí)三組之間均無(wú)顯著性差異(P均>0.05)；于120小時(shí)DEA組(4.0148±0.2015)顯著高于UTI組(1.5938+±.1259)(P<0.05)。③膿毒癥患者TNF-α的變化：PBMCs中TNF-α mRNA表達(dá)量于入院時(shí)UTI組、NAT組、DEA組均無(wú)顯著差異(P均>0.05)；24小時(shí)NAT組(

7、1.1811±0.7965)顯著高于UTI組(0.7833±0.4731)(P<0.01)；而48小時(shí)、120小時(shí)三組之間均無(wú)顯著差異(P均>0.05)。④MODS患者的臨床評(píng)分：在膿毒癥引起的MODS患者中，UTI組患者平均年齡(52.00±17.71)歲(32～70)歲，DEA組患者平均年齡(68.00±7.21)歲(62～76)歲，UTI組與DEA組患者年齡構(gòu)成無(wú)顯著差異；MODS評(píng)分UTI組(10.25±1.20)分(7～14)

8、分，DEA組為(20.00±3.30)分(15～25)分，DEA組顯著高于UTI組(P<0.05)；本研究中死亡構(gòu)成比為37.5％。⑤在膿毒癥患者中，IL—26mRNA表達(dá)量與IL—26血清蛋白含量呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.386，P<0.05)；TNF—αmRNA表達(dá)量與TNF—α血清蛋白含量呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.287，P<0.05)；IL—26mRNA表達(dá)量與STAT—3mRNA表達(dá)量呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.647，P

9、<0.05)；而與STAT-1與TNF—α之間則無(wú)明顯的相關(guān)性。STAT-1mRNA表達(dá)量與TNF—α mRNA表達(dá)量之間呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.385，P<0.05)；同時(shí)，STAT-1mRNA表達(dá)量與STAT—3mRNA表達(dá)量也呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.266，P<0.05)；STAT—3mRNA表達(dá)量與TNF—α mRNA表達(dá)量無(wú)明顯相關(guān)性。 結(jié)論：⑴在膿毒癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，烏司他丁可使IL—26及STAT—3峰值