miRNA-181a靶位點單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　探討胃癌中miR-181a靶位點單核苷酸多態(tài)性(SNP)對胃癌發(fā)病風(fēng)險的影響,并且探索其可能的分子機制。
　　方法:
　　1.運用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-181a所有靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)的SNP位點,選取位于miR-181a靶位點的SNP,并通過病例-對照研究(包括500例胃癌患者和502例正常對照者),采用PCR-RFLP方法檢測所選取的SNP與胃癌易感性和預(yù)后的關(guān)系。
　　2.在5

2、0對人胃癌和癌旁非癌組織和50例正常人胃粘膜組織進(jìn)行SNP基因分型,檢測miR-181a和SNP對于基因的表達(dá)情況及其與基因型的關(guān)系。
　　3.構(gòu)建不同基因型的表達(dá)載體,采用雙熒光素酶驗證miRNA與該基因的關(guān)系,并檢測6株胃癌細(xì)胞株和正常胃粘膜細(xì)胞株GES-1中miRNA和該基因的表達(dá)情況,選取一株細(xì)胞進(jìn)行miRNA過表達(dá)和抑制研究,探討miR-181a對靶基因表達(dá)的調(diào)控。
　　結(jié)果:
　　1.通過生物信息學(xué)預(yù)測mi

3、R-181a靶位點SNP,選取其中的rs12537(MTMR3),rs1460008(EREG)和rs10954213(IRF5)三個SNP位點,通過病例-對照研究,發(fā)現(xiàn)rs12537與胃癌的發(fā)病風(fēng)險有關(guān),其余兩個SNPs與胃癌無關(guān);rs12537的CT+TT基因型顯著增加胃癌易感性(adjustedOR=1.89,95％CI:1.45-2.46,P<0.01),并縮短總生存期(HR=1.8,95%CI:1.03-1.83,P=0.02

4、9)。
　　2.50例胃癌組織中MTMR3和癌旁非癌組織無顯著差異(P=0.071),但兩者明顯低于正常胃粘膜組織(P<0.001);而miR-181a表達(dá)則在三組織中依次遞增(P<0.001);CT基因型的胃癌組織中MTMR3表達(dá)明顯低于CC基因型(P=0.013),而兩組間miR-181a無顯著差異(P=0.135)。
　　3.生物信息學(xué)預(yù)測T等位基因增加了miR-181a靶位點,可能導(dǎo)致miR-181a對MTMR3抑制

5、增強。雙熒光素酶進(jìn)行靶基因驗證發(fā)現(xiàn),過表達(dá)miR-181a能顯著抑制MTMR33’UTR的熒光活性,且對包含rs12537T等位基因的質(zhì)粒的表達(dá)抑制強于C等位基因,但無顯著差異(P=0.055)。細(xì)胞學(xué)分析發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-181a能抑制SGC-7901細(xì)胞中MTMR3的蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.本研究首次報道了rs12537與胃癌的易感性和預(yù)后有關(guān);
　　2.miR-181a及其直接靶基因MTMR3在胃癌中扮