斑馬魚毒性微量模型的建立及其在海洋天然產(chǎn)物篩選評價中的應(yīng)用.pdf

1、海洋特殊的生態(tài)環(huán)境賦予海洋生物豐富的物種多樣性和化學(xué)多樣性。海洋動物,特別是海綿、珊瑚等海洋無脊椎動物在激烈的生存競爭中演化形成了有效的化學(xué)防御機制,產(chǎn)生的各種次級代謝產(chǎn)物具有魚毒、克生、抗生物污著、殺蟲、抑藻、抗菌等化學(xué)生態(tài)效應(yīng),同時也是創(chuàng)新藥物研究和開發(fā)的寶貴資源。如何有效利用海洋藥用生物資源發(fā)現(xiàn)真正有研究開發(fā)價值的藥物先導(dǎo)化合物,一個關(guān)鍵性的重要環(huán)節(jié)就是化合物的安全性評價。目前常用的哺乳動物模型難以進行大規(guī)模操作,耗時長,耗資大。

2、而斑馬魚具有個體小、體外發(fā)育、高繁殖力、胚胎光學(xué)透明等優(yōu)勢,為實驗操作過程提供了極大的便利,已逐步成為藥物篩選評價領(lǐng)域的新寵兒。本研究建立了斑馬魚毒性微量模型,試圖為藥物發(fā)現(xiàn)和化學(xué)生態(tài)學(xué)研究提供雙向模型。利用建立的模型,對分離白海綿、珊瑚及其共附生微生物的次級代謝產(chǎn)物進行了篩選,對化合物的毒性和化學(xué)生態(tài)學(xué)活性進行了評價,探討了該模型在藥物安全性評價和海洋天然產(chǎn)物的化學(xué)生態(tài)效應(yīng)評價中應(yīng)用的可行性。
　　 斑馬魚毒性微量模型中,利用

3、斑馬魚Danio rerio,取受精卵,在24孔板上,孵化一定時間,考察待測物的毒性和活性。利用倒置顯微鏡觀察胚胎發(fā)育至72h內(nèi)的形態(tài)學(xué)變化,選擇卵凝結(jié)、死亡、無自主運動、心率異常、延遲發(fā)育、延遲孵化、尾部畸形、脊索畸形和形體畸形等為觀察指標(biāo)。對所建模型的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性等進行了考察。
　　 運用所建立的模型,對分離自海綿、珊瑚及其共附生微生物的次級代謝產(chǎn)物(134個化合物)的毒性和活性進行了篩選評價,并初步探討了化合物的

4、構(gòu)效關(guān)系。發(fā)現(xiàn),在甾體類化合物中,24-縮酮甾體和孕甾酮類化合物較其他類型的甾體化合物對斑馬魚胚胎發(fā)育過程有較大的影響；在倍半萜類化合物中,多數(shù)奠類倍半萜和部分沒藥烷型倍半萜表現(xiàn)出明顯的毒性；在二萜化合物中,brianane型二萜的活性普遍較低,而含呋喃環(huán)的二萜類化合物則表現(xiàn)出明顯的毒性；在二倍半萜中,scalarane型二倍半萜的活性普遍較低；多數(shù)微生物來源的聯(lián)苯醚類化合物表現(xiàn)出不同的致死、亞致死和致畸的毒理學(xué)終點；部分聚酮類化合物表