鹵蟲生物活性篩選模型的建立及其在竹提取物中的應(yīng)用.pdf

1、本文以鹵蟲無(wú)節(jié)幼體為模式生物建立了一種新的殺蟲活性生物測(cè)定方法。通過(guò)測(cè)定鹵蟲對(duì)不同殺蟲劑的敏感性，探討了鹵蟲作為殺蟲生物活性篩選模型的可行性；通過(guò)研究不同因素對(duì)生物測(cè)定結(jié)果的影響，建立了以鹵蟲為生物模型的殺蟲活性快速篩選方法；應(yīng)用所建立的鹵蟲生物測(cè)定法對(duì)62種竹提取物進(jìn)行了殺蟲活性篩選，并與傳統(tǒng)的蚜蟲生物測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較分析，對(duì)鹵蟲生物活性篩選模型的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。研究結(jié)果如下：
　　 1．鹵蟲對(duì)常用殺蟲劑的敏感性測(cè)定結(jié)果表

2、明：鹵蟲Ⅱ～Ⅲ期無(wú)節(jié)幼體（接觸殺蟲劑24h～48h）對(duì)殺蟲活性物質(zhì)最為敏感，而且鹵蟲對(duì)不同種類殺蟲劑的敏感性存在差異，除對(duì)殺蟲單和滅多威敏感性較差外，對(duì)其它供試殺蟲劑均表現(xiàn)出較高的敏感性。其中，阿維菌素、氟鈴脲等對(duì)鹵蟲48h的LC50為0.02mg/L、0.023mg/L，三唑磷、噠螨靈、毒死蜱、氟蟲腈等48h的LC50為0.58mg/L、0.72mg/L、1.04mg/L、5.97mg/L，西維因、殺蟲環(huán)、敵敵畏、殺螟丹、速滅威、溴氰

3、菊酯等48h的LC50為17.48mg/L、18.12mg/L、24.69mg/L、26.91mg/L、30.90mg/L、33.33mg/L，而殺蟲單和滅多威48h的LC50分別為443.37mg/L、535.91mg/L。可以看出，鹵蟲無(wú)節(jié)幼體對(duì)大多數(shù)化學(xué)殺蟲劑均表現(xiàn)出較高的敏感性，能夠作為殺蟲活性物質(zhì)篩選的生物模型。
　　 2．不同因素對(duì)鹵蟲生物測(cè)定結(jié)果影響的研究表明：鹵蟲無(wú)節(jié)幼體培養(yǎng)溶液的鹽度、pH值、有機(jī)溶劑、培養(yǎng)溫度

4、、光照周期等因素都會(huì)影響到鹵蟲生物測(cè)定的結(jié)果。當(dāng)人工海水鹽度為1‰時(shí)，鹵蟲存活率僅為5.03％，而在清水中無(wú)一存活；培養(yǎng)溶液pH為4.5時(shí)，鹵蟲存活率為28.86％，pH為3時(shí)，鹵蟲無(wú)一存活；溫度高于35℃會(huì)影響到鹵蟲的存活率，40℃時(shí)，為30.63％，溫度升至45℃時(shí)，鹵蟲存活率降為2.06％；試驗(yàn)過(guò)程中，過(guò)長(zhǎng)的光照周期也會(huì)影響到鹵蟲的存活，持續(xù)光照時(shí)，鹵蟲存活率只有75.57％；乙酸乙酯、乙腈等有機(jī)溶劑對(duì)鹵蟲無(wú)節(jié)幼體毒性較大，1％濃

5、度下，鹵蟲存活率為22.6％、7.35％，而在1％正己烷、二氯甲烷、石油醚、甲苯、苯等存在下，鹵蟲無(wú)一存活。另外，待測(cè)溶液體積的大小不會(huì)對(duì)鹵蟲的存活率產(chǎn)生影響，試驗(yàn)過(guò)程中可取中間量1.5mL。在上述研究的基礎(chǔ)上，確立了鹵蟲生物測(cè)定方法：培養(yǎng)鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的海水鹽度范圍應(yīng)在5‰～120‰，溫度可控制在10℃～35℃，pH范圍為5～10，光照周期不宜超過(guò)18L-6D，待測(cè)物質(zhì)可用丙酮、甲醇、乙醇的等有機(jī)溶劑溶解，有機(jī)溶劑濃度可控制在1％以下，

6、將鹵蟲和1.5mL待測(cè)液加入到24孔培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，48h后，體式顯微鏡下觀察鹵蟲死亡個(gè)體數(shù)及試蟲總數(shù)，計(jì)算死亡率，評(píng)價(jià)待測(cè)液的殺蟲生物活性。
　　 3．利用鹵蟲生物測(cè)定法對(duì)62種竹葉丙酮提取物進(jìn)行了殺蟲活性篩選。結(jié)果表明，供試濃度為1.0g/L的竹提取物對(duì)鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的殺蟲生物活性差異很大。生物活性較好的有方竹、苦竹、綠竹、觀音竹、毛竹、水竹、橄欖竹、短穗竹等8種提取物，鹵蟲死亡率分別為100％、97.82％、93.11％、92

7、.14％、86.43％、84.80％、84.79％、75.10％，對(duì)鹵蟲48h的LC50分別為：144.2mg/L、323.9mg/L、388.6mg/L、399.1mg/L、436.9mg/L、474.7mg/L、565.6mg/L、631.8mg/L；鵝毛竹等19種竹提取物作用下，鹵蟲的死亡率在40％～70％；粉單竹等14種竹提取物作用下，鹵蟲的死亡率在20％～40％；壽竹等21種竹提取物作用下，鹵蟲的死亡率不足20％，其中尖頭青竹

8、、銀絲竹、籬竹、箬竹、花吊絲竹等5種竹提取物對(duì)鹵蟲無(wú)生物活性。
　　 4．為驗(yàn)證鹵蟲生物活性篩選模型的準(zhǔn)確性，以蚜蟲為供試生物模型，采用傳統(tǒng)浸漬法對(duì)62種竹提取物的殺蟲生物活性進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明：生物活性較好的有方竹、苦竹、綠竹、毛竹、觀音竹等5種竹提取物，蚜蟲72h死亡率為86.25％，81.25％、80％、78.75％、74.5％；水竹等8種竹提取物作用下，蚜蟲的死亡率在40％～70％；菲白竹等11種竹提取物作用下，蚜蟲的

9、死亡率在20％～40％；黃間金碧玉竹等38種竹提取物作用下，蚜蟲的死亡率不足20％，其中尖頭青竹、銀絲竹、硬頭黃竹、籬竹、花吊絲竹等5種竹提取物對(duì)蚜蟲沒(méi)有生物活性。可見(jiàn)，兩種方法的篩選結(jié)果大體趨勢(shì)一致，對(duì)鹵蟲活性高的竹提取物對(duì)蚜蟲也表現(xiàn)出較好的生物活性，對(duì)鹵蟲活性低的，對(duì)蚜蟲效果也比較差，而且絕大部分竹提取物對(duì)鹵蟲的活性明顯高于蚜蟲，證明利用鹵蟲生物活性篩選模型篩選殺蟲活性物質(zhì)是可靠的。
　　 鹵蟲作為殺蟲活性測(cè)定的模型生物具有