川芎嗪促進大鼠部分肝切除后再生修復機制的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　肝臟是機體的重要代謝器官，許多疾病可以導致肝損傷。機體臟器和組織存在自身損傷修復的功能，同時，營養(yǎng)分子、藥物、手術(shù)等刺激也可促進損傷的修復。隨著肝臟疾病的增多，越來越多的患者需要接受肝切除術(shù)或肝移植術(shù)，而肝切除術(shù)或移植術(shù)同樣依靠肝臟自身的再生修復能力。
　　肝臟損傷或部分切除后的再生修復能力與活性氧作用以及抗氧化防御功能密切相關(guān)。因此，篩選有效的抗氧化劑，探討利用抗氧化劑促進肝切除后再生，研究肝臟再生修復新機

2、制，是學術(shù)界重點關(guān)注的熱點領域之一。
　　川芎嗪(四甲基吡嗪，TMPZ)為傳統(tǒng)中藥川芎中提取的單一化學成分藥物，該藥物具有明顯的高效低毒特點。本研究小組前期結(jié)果表明，川芎嗪有較強的抗氧化作用。我們假設：川芎嗪的抗氧化作用對部分肝切除后修復再生可能存在促進作用。
　　因此，在觀察肝臟部分切除后的修復過程中，測定氧化應激相關(guān)指標、抗氧化相關(guān)指標變化的同時給予抗氧化劑，對于研究肝臟部分切除后再生修復的新機制具有重要意義。
　

3、　實驗目的：
　　本實驗利用中年大鼠肝切除模型，通過檢測轉(zhuǎn)氨酶、MDA含量變化、肝細胞增生核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)表達及超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，ＳＯＤ）表達的變化，探討川芎嗪對中年大鼠肝切除后肝再生的促進作用及其可能機制。
　　實驗方法與研究方案：
　　1.建立不同年齡段大鼠肝切除模型。
　?、俨糠指吻谐椒ǖ难芯?。

4、　?、诟倪M由Higgins和Aderson建立的70％大鼠肝切除模型。
　　③建立不用年齡段大鼠70％肝切除模型。
　　④通過對肝再生率等指標的檢測觀察不同年齡段大鼠肝切除后肝再生的情況。
　　⑤檢測MDA等指標，觀察氧化還原調(diào)節(jié)的重要作用。
　　2.在細胞水平上觀察ROS對肝細胞增殖的影響及川芎嗪的保護作用。
　?、偻ㄟ^MTT實驗觀察tBHP對QZG細胞活力的影響。
　?、谕ㄟ^MTT實驗觀察川芎嗪的

5、保護作用。
　?、蹤z測SOD的表達及活性變化。
　　3.研究川芎嗪促進大鼠部分肝切除后修復性再生的機制
　　①通過對肝功和肝再生率等指標的檢測證明川芎嗪的促再生作用。
　?、谕ㄟ^對MDA等指標的檢測證明川芎嗪在氧化還原調(diào)節(jié)中發(fā)揮的重要作用。
　?、弁ㄟ^westernblot等方法證明川芎嗪促再生作用的可能分子機制。
　　實驗結(jié)果：
　　1．同2月齡大鼠相比，隨著年齡的增高，肝切除術(shù)后肝再生率下降

6、，肝功能降低，PCNA表達降低，MDA損傷加重。提示年齡對肝切除術(shù)后肝再生有著顯著影響，其機制可能是機體抗氧化能力下降，以至肝切除術(shù)中產(chǎn)生的氧化應激損傷加重，從而影響了肝臟正常再生。
　　2．tBHP可以引起細胞活力損傷。給予川芎嗪治療可以有效地提高SOD的表達，減少MDA生成，阻止tBHP介導的細胞活力損傷。
　　3．經(jīng)過對中年組大鼠預防性給予川芎嗪治療發(fā)現(xiàn)，川芎嗪可以有效降低ALT、AST水平，改善肝功能；降低MDA含量

7、，減少肝臟脂質(zhì)過氧化損傷；增加肝細胞中PCNA的蛋白表達，改善肝臟再生環(huán)境，促進肝細胞增殖。其機制可能是通過促進SOD的表達，提高抗氧化能力，降低氧化損傷，促進PCNA的表達。
　　結(jié)論：
　　1.隨著年齡的增高，肝切除術(shù)引起的氧化損傷加重，肝切除術(shù)后肝功能和肝再生能力逐漸下降。
　　2.無論是正常肝細胞的生長發(fā)育過程，還是肝切除術(shù)后肝再生的過程，活性氧都起了至關(guān)重要的作用。過量活性氧引起的氧化損傷，可能阻礙了肝細胞的