水皰性口炎病毒與Monocyte和MoDC的互作研究.pdf

1、水皰性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus,VSV）屬于彈狀病毒科水皰病毒屬，每年給全球養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，由于宿主—病原體之間存在復(fù)雜的相互作用而導(dǎo)致免疫力的降低，有效控制這種疾病仍然是一個挑戰(zhàn)，至今還未有可針對VSV的疫苗產(chǎn)生。
　　完整的水皰性口炎病毒粒子包含5種主要結(jié)構(gòu)蛋白，在小鼠實驗中已經(jīng)證明其中的基質(zhì)蛋白M與細(xì)胞致病有關(guān)，但其在天然宿主致病機制中的作用并不清楚。為了探究VSV和M蛋白與宿

2、主天然免疫細(xì)胞的互作，實驗首先利用磁珠分選技術(shù)從豬血中分離得到單核細(xì)胞，再用豬GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)單核細(xì)胞得到樹突狀細(xì)胞。用M蛋白第51位甲硫氨酸敲除后的重組病毒（VSVΔM51-GFP）和第51位甲硫氨酸敲除、第221位纈氨酸突變?yōu)楸奖彼?、?26位絲基酸突變?yōu)榫彼岬闹亟M病毒（VSV-MT-GFP）以及野生型重組病毒（VSV-GFP）感染豬外周血單核細(xì)胞（CD14+monocyte）和樹突狀細(xì)胞（Monocyte-deriv

3、ed dendritic cells，MoDCs），通過空斑法制作病毒生長曲線，用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的感染狀況，ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子表達(dá)變化。
　　結(jié)果表明，VSV、VSVΔM51、VSV-MT三種病毒均可感染Monocyte，但無法在細(xì)胞中擴增，在MOI=1時，毒性最強的野生型VSV對其感染率僅為8.5％，即使將孵育細(xì)胞的病毒濃度增加十倍，其感染率也僅為16%。三種病毒均能感染MoDC細(xì)胞并在

4、細(xì)胞中擴增，在MOI=1時，上清中的病毒滴度在感染細(xì)胞12 h可達(dá)到最大值，隨后逐漸緩慢降低。與野生型VSV相比，VSVΔM51、VSV-MT細(xì)胞致病性依次減弱。重組病毒能有效激活MoDC細(xì)胞中TNF-α、IL-8、IFN-α等免疫相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，且其激活DC細(xì)胞的能力與M蛋白突變程度呈正相關(guān)。通過體外和體內(nèi)實驗，說明基質(zhì)蛋白M是一種重要的毒力因子，可以作為研發(fā)安全VSV載體疫苗過程中的理想目標(biāo)。
　　此外，為了檢測VSV感染