抗病毒蛋白Y3與TMV CP的體外互作研究.pdf

1、植物病毒是一種寄生在植物細胞甚至是細胞核內的專性寄生生物，由它引起的植物病毒病對農業(yè)生產具有嚴重危害，人們一直都在尋求防治植物病毒病的方法，目前為止發(fā)現(xiàn)了一些能抑制植物病毒的蛋白，如核糖體失活蛋白，但還未進行商品化生產。研究發(fā)現(xiàn)有些抗病毒蛋白與病毒粒子的外殼蛋白（CP）有著關聯(lián)，了解其作用機制有助于抗病毒藥劑的研制和抗病毒轉基因作物的育種，這些都為日益嚴重的植物病毒病害提供新的解決策略和防治方法。
　　從食用菌毛頭鬼傘（Copri

2、nus comatus）中提取的一種堿性蛋白Y3對煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）具有抑制作用，其作用機理可能是Y3對CP的體外鈍化作用抑制了病毒蛋白的合成，從而降低病毒的侵染率。為進一步驗證Y3與CP是如何互作，本試驗采用了基因工程的方法，首先通過克隆分別得到蛋白Y3和CP基因cDNA序列，Y3基因cDNA序列中包括1個393 bp的ORF，該ORF推測可編碼1條多肽鏈，含有130個氨基酸，CP基因cD

3、NA序列中包括一個480bp的ORF，該最大ORF推測可編碼1條含159個氨基酸的多肽鏈，利用ClustalX2.0、DNAMAN6.0軟件比對獲得的序列和已發(fā)表的蛋白Y3及CP cDNA序列，一致性分別達到96％和99%；然后將獲得的y3基因cDNA序列與載體pGBKT7連接構建誘餌載體，CP基因與載體pGADT7連接構建獵物載體，分別轉化酵母AH109中培養(yǎng)獲得融合蛋白的表達，最后將pGBKT7-y3誘餌載體和pGADT7-CP獵物