shRNA沉默CXCR4基因?qū)β殉舶┘?xì)胞EGFR信號通路分子機(jī)制的研究.pdf

1、分類號：學(xué)號：2 0 1 0 0 2 5掣㈣㈣ Y 2 4 4 1 0 0 7 泰山壓虧窿碩士學(xué)位論文論文題目：s h R N A 沉默C X C R 4 基因?qū)β殉舶┘?xì)胞E G F R 信號通路分子機(jī)制的研究作 者 姓 名：王愛霞學(xué) 科、專 業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)學(xué) 位 類 型：學(xué)術(shù)學(xué)位型研 究 方 向：婦科腫瘤指 導(dǎo) 教 師：靳衛(wèi)國教授入 學(xué) 時 間：2 0 1 0 年0 9 月論文工作起止時間：2 0 1 1 年0 8 ～2 0 1 3 年

2、0 1 月s h R N A 沉默C X C R 4 基因?qū)β殉舶┘?xì)胞E G F R 信號通路分子機(jī)制的研究研究生：王愛霞專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)導(dǎo)師：靳衛(wèi)國教授中文摘要目的本課題組前期研究已經(jīng)證明以趨化因子4 為靶向的s h R N A 能夠明顯抑制卵巢癌S W 6 2 6 細(xì)胞C X C R 4 m R N A 及蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力。因此，本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上更深一步研究抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法擴(kuò)增含

3、C X C R 4 - s h R N A 質(zhì)粒及空質(zhì)粒載體，利用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞S W 6 2 6 細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)分為3 組，干擾組( 轉(zhuǎn)染C X C R 4 一s h R N A 的S W 6 2 6 細(xì)胞) 、空載體組( 轉(zhuǎn)染空載體的S W 6 2 6 細(xì)胞) 及空白對照組( 不給予任何處理的細(xì)胞) ，轉(zhuǎn)染4 8 小時后，于倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率；利用酶標(biāo)儀結(jié)合J C 一1 法檢測腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的變化，

4、采用實(shí)時定量R T - P C R 法檢測A S K lm R N A 的表達(dá)情況。細(xì)胞免疫化學(xué)和／或W e s t e r n B l o t 檢測C a s p a s e 一3 、E G F R 、E R K l ／2 、P —C —J u n 、A k t 、T N F —Q 、N F r , B p 6 5 、I r ．B ．Q 蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果1 ．轉(zhuǎn)染4 8 小時后在倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率：當(dāng)細(xì)胞處于對數(shù)生長期，

5、狀態(tài)良好，細(xì)胞匯合度達(dá)9 0 ％左右，按脂質(zhì)體與質(zhì)粒之比為1 ：1 的比例進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率達(dá)到最高，人卵巢癌細(xì)胞S W 6 2 6 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)8 0 ％左右。2 ．J C 一1 法檢測轉(zhuǎn)染前后干擾組與空白對照組及空載體組相比，線粒體膜電位普遍降低( P < 0 ．0 0 1 ) ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( 尸< 0 ．0 5 ) ，而空白組與轉(zhuǎn)染空載體組相比∽= 0 ．2 3 4 ) ，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 ．運(yùn)用R e