LXR激動(dòng)劑調(diào)節(jié)小鼠巨噬細(xì)胞脂質(zhì)內(nèi)穩(wěn)態(tài)及其炎癥因子分泌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]肝X受體(liverXreceptors，LXRs)是配體依賴性的核轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控多個(gè)與脂質(zhì)代謝及炎癥反應(yīng)有關(guān)的重要蛋白質(zhì)的表達(dá)，在維持膽固醇內(nèi)穩(wěn)態(tài)和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。LXRs由DNA結(jié)合域及配體結(jié)合域構(gòu)成。LXRs與維甲酸X受體(retinoidXreceptors，RXRs)形成的異源二聚體可被LXRs配體和/或RXRs配體激活，通過(guò)與靶基因上的肝X受體反應(yīng)元件(LXRresponseelements，LXRE)

2、結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄。LXRs的配體包括天然的氧化甾醇(oxysterol)如：20(S)-羥基膽甾醇、22(R)-羥基膽甾醇、24(S)-羥基膽甾醇、27-羥基膽甾醇、24(S)，25-環(huán)氧膽固醇以及人工合成的T-1317、GW3965。LXRs激動(dòng)劑一方面可調(diào)節(jié)膽固醇和脂肪酸代謝，另一方面可調(diào)節(jié)機(jī)體先天性免疫反應(yīng)。LXRs激動(dòng)劑通過(guò)上調(diào)巨噬細(xì)胞ABCA1、ApoE的表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞中膽固醇的外流；并可下調(diào)巨噬細(xì)胞內(nèi)一些促炎癥因子如

3、：iNOS、COX-2、MMP-9的表達(dá)。第三軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)教研室采用高立體選擇性化學(xué)合成法，以豬去氧膽酸為原料高效合成了LXRs激動(dòng)劑3β-羥基-5α，6α-環(huán)氧膽酸甲酯(methyl3β-hydroxy-5α,6α-epoxycholante，MHEC)。本實(shí)驗(yàn)采用兩種LXR激動(dòng)劑(MHEC和T-1317)為實(shí)驗(yàn)用藥，對(duì)培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究。探討LXR激動(dòng)劑對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞ABCAl蛋白、清道夫

4、受體以及TNF-α、IL-6的影響。 [方法]應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)LXR激動(dòng)劑對(duì)RAW264.7細(xì)胞ABCAl蛋白表達(dá)的影響。用熒光標(biāo)記的ac-LDL(Dil-Ac-LDL)孵育細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度，分析LXR激動(dòng)劑對(duì)RAW264.7細(xì)胞清道夫受體活性的影響。應(yīng)用夾心法ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α及IL-6水平，分析LXR激動(dòng)劑對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的TNF-α及IL-6產(chǎn)生和分泌的影響。 [

5、結(jié)果] 1.MHEC和T-1317兩種LXRs激動(dòng)劑均可顯著促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞ABCAl蛋白的表達(dá)；9-cRA與LXRs激動(dòng)劑聯(lián)合作用時(shí)，ABCAl蛋白表達(dá)的增加更為顯著。 2.MHEC和T-1317兩種LXRs激動(dòng)劑均可使RAW264.7細(xì)胞的清道夫受體活性顯著降低。RXRs激動(dòng)劑9-cRA與T-1317聯(lián)合作用時(shí)，清道夫受體活性有更顯著的降低；而9-cRA與MHEC聯(lián)合作用時(shí)，清道夫受體活性與單純應(yīng)用MHEC無(wú)

6、顯著差異。 3.ox-LDL可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞TNF-α、IL-6的產(chǎn)生和分泌，而LXR激動(dòng)劑MHEC或T-1317均可顯著減輕ox-LDL的這種作用。 [結(jié)論]小鼠巨噬細(xì)胞ABCAl蛋白表達(dá)受LXRs調(diào)控。國(guó)產(chǎn)LXR激動(dòng)劑MHEC能明顯上調(diào)RAW264.7細(xì)胞ABCAl蛋白表達(dá)，其上調(diào)程度與T-1317相似。與LXR/RXR活化的機(jī)制相吻合，LXR激動(dòng)劑(MHEC與T-1317)和RXR激動(dòng)劑(9-cRA)聯(lián)合

7、應(yīng)用存在協(xié)同作用，可進(jìn)一步上調(diào)ABCAl蛋白在RAW264.7細(xì)胞表達(dá)，從而促進(jìn)膽固醇外流與膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)。LXR激動(dòng)劑(MHEC與T-1317)均可降低RAW264.7細(xì)胞清道夫受體活性，減少由清道夫受體介導(dǎo)的ac-LDL攝取。LXR激動(dòng)劑可能通過(guò)該作用進(jìn)一步降低巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量，從而抑制巨噬細(xì)胞泡沫化。另外，LXR激動(dòng)劑(MHEC與T-1317)可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TNF-α及IL-6產(chǎn)生與分泌，有可能減輕