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文檔簡介
1、本文研究目的:采用凋亡(1.33μmol/L順鉑所致)以及(熱休克、反復(fù)凍融和5.32μmol/L順鉑所致)壞死的肺腺癌A549細(xì)胞作為腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA),分別刺激人外周血單核細(xì)胞來源的DC(monocyte-derived DC,mo-DC);通過比較凋亡和壞死的A549細(xì)胞對mo-DC表型、超微結(jié)構(gòu)和白介素(interleukin,IL)-12分泌量的影響,來評估二者對誘導(dǎo)mo-
2、DC成熟能力的影響,同時(shí)觀察凋亡的肺腺癌A549細(xì)胞所誘導(dǎo)成熟的mo-DC(A-DC)對NK細(xì)胞殺傷能力的影響。 研究材料與方法: 體外誘導(dǎo)DC,并用不同實(shí)驗(yàn)條件下所得的TAA負(fù)載于DC;流式細(xì)胞術(shù)測定DC表面標(biāo)志,電鏡觀察DC形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),ELISA法測定IL-12分泌量;流式細(xì)胞術(shù)和Hoechst染色判定A549細(xì)胞凋亡;4h-<'51>Cr釋放法測定A-DC對CD56+NK細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞能力的影響。:
3、 研究結(jié)果: (1)順鉑濃度為1.33μmol/L時(shí),A549細(xì)胞凋亡率可達(dá)19.7%,細(xì)胞大多被阻滯在G1期;順鉑濃度為5.44μmol/L時(shí),A549細(xì)胞幾乎全部死亡。 (2)掃描電鏡下可見DC伸展出大量大小不一、扁平的胞質(zhì)突起,其末端圓鈍且細(xì)胞膜光滑無皺折。成熟的DC(mature DC,mDC)于不成熟的DC(immature DC,iDC),但表面突起較iDC減少。 (3)透射電鏡下可見DC的胞體周圍
4、有不規(guī)則突起和褶皺;胞核染色深,偏向一側(cè),形狀不規(guī)則,多為分葉狀,內(nèi)異染色質(zhì)沿核邊高度凝聚;胞質(zhì)線粒體較為豐富,較多吞飲大泡及小泡。mDC胞體周圍突起較iDC減少。 (4)人DC特異性表面標(biāo)志CDla為68.7%。不同實(shí)驗(yàn)條件(L-DC、H-DC、A-DC和N-DC)刺激下DC的表面標(biāo)志HLA-DR分別為6.98%、34.12%、39.49%、19.13%,CDS0分別為11.2%、40.55%、54.33%、49.76%。A-
5、DC的表面標(biāo)志HLA-DR顯著高于L-DC和N-DC的表達(dá)(P<0.01),但與H-DC表達(dá)相近(P>0.05);A-DC與N-DC表面均高表達(dá)CD80,雖然前者略高于后者,但二者間無顯著性差異(P>0.05)。 (5)DC和L-DC僅能分泌少量IL-12,其細(xì)胞上清液濃度低于20 pg·ml<'-><';1>;H-DC、N-DC和A-DC分泌IL-12的能力增強(qiáng),其細(xì)胞上清液濃度分別為(201.5±30.3)、(41.2±5.
6、9)和(289.7±45.2)Pg·ml<'-1>。N-DC的IL-12分泌量較DC和L-DC有增加,H-DC和A-DC的IL-12分泌量均明顯增加,與其余各組間有顯著性差異(P<0.01),其中尤以A-DC的IL-12分泌量最高,與H-DC間差異顯著(P<0.05)。 (6)與NK細(xì)胞對K562的裂解能力比較,DC和A-DC均能使NK細(xì)胞對K562的殺傷能力增強(qiáng),而且差異顯著(P<0.01):在DC作用下,當(dāng)效靶比(effec
7、tor:target,E:T)為5、10和20時(shí),NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率分別為(3.7±0.96)%、(18.33±2.29)%和(46.8±3.39)%;在A-DC作用下,E:T為5、10和20時(shí),NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷能力進(jìn)一步增加,其裂解率分別為(13.33±0.76)%、(33.67±1.19)%和(55.87±2.50)%。 (7)當(dāng)A-DC的上清液加入NK細(xì)胞時(shí),NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷能力顯著增加
8、,如E:T為20時(shí),K562細(xì)胞裂解率為(45.73±0.06)%,而未加A-DC時(shí)K562細(xì)胞裂解率(10.7±0.529)%(P<0.01)。 (8)當(dāng)E:T為20時(shí),NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率是(47.1±0.96)%;加入干擾素(interferon,IFN)<,-γ>后,NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率是(46.9±4.85)%,與NK細(xì)胞對照組無顯著差異(P>0.05);加入IL-12后,NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂
9、解率是(61.1±1.57)%,與另外二組差異顯著(P<0.01)。 (9)當(dāng)E:T為20時(shí),NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率是(19.2±0.82)%;加入A-DCsup后,NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率是(48.9±3.84)%,與NK細(xì)胞對照組差異顯著(P<0.01)。加入IFN-γab后,A-DCsup作用下的NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的裂解率是(45.3±1.31)%,與A-DCsup組無顯著差異(P>0.05);加入IL-
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