樹突狀細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)抗子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞毒性反應(yīng)的體外研究.pdf

1、目的：樹突狀細(xì)胞(DC)是目前所發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)、也是唯一能激活初始型T細(xì)胞的專職抗原提呈細(xì)胞，具有強(qiáng)大的激活T細(xì)胞和B細(xì)胞的能力，控制著體內(nèi)免疫反應(yīng)過程，在免疫應(yīng)答中處于中心地位。 研究表明，腫瘤患者之所以缺乏有力的抗腫瘤免疫應(yīng)答，原因之一是其體內(nèi)DC功能缺陷，無法有效提呈腫瘤抗原、激活T細(xì)胞識別和殺傷腫瘤細(xì)胞。因此，通過體外擴(kuò)增DC并增強(qiáng)其抗原提呈功能，建立以DC疫苗為基礎(chǔ)的主動特異性免疫治療，已成為腫瘤免疫治療的研究熱點(diǎn)。本

2、實(shí)驗(yàn)研究臍血來源DC的培養(yǎng)方法，觀察子宮內(nèi)膜癌凍融抗原致敏DC疫苗體外誘導(dǎo)生成的CTL對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的特異性殺傷效應(yīng)，探討DC疫苗應(yīng)用于子宮內(nèi)膜癌免疫治療的可行性。 方法：取對數(shù)生長期的子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞經(jīng)反復(fù)凍融制備成凍融抗原。體外采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法從正常臍血分離出單核細(xì)胞，在重組人粒-單核細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白細(xì)胞介素4(rhIL-4)和腫瘤壞死因子α(rhTNF-

3、α)作用下誘導(dǎo)分化為DC。DC經(jīng)凍融抗原致敏后形成DC疫苗，用以激活T淋巴細(xì)胞及誘導(dǎo)生成抗原特異性CTL。利用倒置顯微鏡觀察DC的生長情況及形態(tài)變化，掃描電鏡觀測成熟DC的表面形態(tài)。采用流式細(xì)胞儀對DC經(jīng)抗原致敏前后的細(xì)胞表型進(jìn)行測定。經(jīng)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)比較抗原致敏DC、未致敏DC及凍融抗原體外刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力。MTT法檢測抗原致敏DC誘導(dǎo)生成的特異性CTL對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞的殺傷作用，并以卵巢癌

4、SK-OV-3細(xì)胞和肝癌SMMC-7721 細(xì)胞作對照；同時(shí)設(shè)立未致敏DC組、凍融抗原組及單純淋巴細(xì)胞組。ELISA法檢測致敏DC組、未致敏DC組、凍融抗原組和單純淋巴細(xì)胞組四組培養(yǎng)上清中IL-12和IFN-γ的含量。 結(jié)論： 1.臍血單核細(xì)胞在體外經(jīng)rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α聯(lián)合誘導(dǎo)下可分化為具有大量指狀突起的DC，該細(xì)胞高表達(dá)CD1a、CD83、CD80、CD86及HLA-DR，能夠刺激同種異體

5、T淋巴細(xì)胞增殖。 2.DC疫苗可在體外刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)產(chǎn)生針對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞的特異性殺傷作用，表明DC可有效提呈子宮內(nèi)膜癌抗原，激發(fā)T細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮高效而特異的抗腫瘤作用。 3.DC疫苗在體外誘導(dǎo)殺傷子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞及分泌細(xì)胞因子方面均明顯強(qiáng)于未致敏DC組、凍融抗原組及單純淋巴細(xì)胞組，表明DC疫苗用于免疫治療的療效將明顯優(yōu)于單純的DC、“常規(guī)”疫苗及免疫增強(qiáng)劑。 4