中國(guó)荷斯坦奶牛乳鐵蛋白基因多態(tài)性與乳腺炎相關(guān)性的研究.pdf

1、本研究選取中國(guó)荷斯坦奶牛群體共計(jì)250頭個(gè)體為研究對(duì)象，采用PCR-RFLP技術(shù)對(duì)試驗(yàn)牛群中存在的乳鐵蛋白基因的四個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增、酶切檢測(cè)和測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)該牛群的乳鐵蛋白基因四個(gè)多態(tài)位點(diǎn)均存在三種基因型；結(jié)合試驗(yàn)牛群的DHI測(cè)定所得到的育種資料記錄和生產(chǎn)性能指標(biāo)（主要選擇體細(xì)胞評(píng)分、產(chǎn)奶量、乳脂率和乳蛋白率），運(yùn)用最小二乘線(xiàn)性模型，對(duì)這幾個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與奶牛乳腺炎之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白基因-916位點(diǎn)的T/G突

2、變和-927位點(diǎn)的G/A突變所產(chǎn)生的不同基因型與生產(chǎn)性狀之間的效應(yīng)檢驗(yàn)不顯著，而+72位點(diǎn)的T/C突變和-478位點(diǎn)的G的插入所產(chǎn)生的不同基因型之間的生產(chǎn)性能指標(biāo)出現(xiàn)差異，并找到了具有乳腺炎抗性的基因型和優(yōu)良的等位基因，為進(jìn)一步的標(biāo)記輔助選擇提供了有力的依據(jù)，并為奶牛乳腺炎的抗病育種工作提供了理論依據(jù)。研究結(jié)果如下： 根據(jù)NCBI上已登錄的乳鐵蛋白基因序列并參考Seyfert所報(bào)道的多態(tài)位點(diǎn)，確定所研究的四個(gè)突變位點(diǎn)并對(duì)乳鐵蛋白

3、基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析。研究發(fā)現(xiàn)：本試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ后w在這四個(gè)位點(diǎn)上均存在突變，分別是-927位點(diǎn)的G到A的突變，-916位點(diǎn)的T到G的突變，-478位點(diǎn)的G的插入和+72位點(diǎn)的T到C的突變，預(yù)期結(jié)果與報(bào)道的一致。 利用改造的酶切位點(diǎn)對(duì)-927位點(diǎn)、-916位點(diǎn)和+72位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行TaqⅠ、HaeⅢ和Eco T14Ⅰ酶切，利用已存在的酶切位點(diǎn)對(duì)-478位點(diǎn)進(jìn)行HpyF10VⅠ酶切，通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)酶切產(chǎn)

4、物檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)在這四個(gè)突變位點(diǎn)上均存在有三種基因型：AA基因型、AB基因型和BB基因型。 結(jié)合DHI測(cè)定所記錄的該試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ旱纳a(chǎn)性能數(shù)據(jù)，利用統(tǒng)計(jì)分析軟件SAS將乳鐵蛋白基因四個(gè)位點(diǎn)上的突變所產(chǎn)生不同基因型對(duì)體細(xì)胞評(píng)分、產(chǎn)奶量、乳脂率和乳蛋白率的效應(yīng)進(jìn)行最小二乘均值顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：+72位點(diǎn)（T/C）的AB基因型個(gè)體的SCS值極顯著低于BB基因型個(gè)體（P<0.01），顯著低于AA基因型個(gè)體（P<0.05），BB基因型個(gè)

5、體與AA基因型個(gè)體差異不顯著（P>0.05）；同時(shí)，AB基因型個(gè)體的產(chǎn)奶量值顯著高于AA基因型、BB基因型個(gè)體（P<0.05），表明本試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ褐蠥B基因型個(gè)體表現(xiàn)出乳腺炎抗性；-478位點(diǎn)（/G） AA基因型個(gè)體的SCS值極顯著低于AB基因型、BB基因型個(gè)體（P<0.01），同時(shí)AA基因型個(gè)體的產(chǎn)奶量值顯著高于AB基因型、BB基因型個(gè)體，表明本試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ褐蠥A基因型個(gè)體表現(xiàn)出了乳腺炎抗性；另外，-478位點(diǎn)（/G） AB基因型個(gè)體的乳