荷斯坦牛HSP70-1基因多態(tài)性與耐熱性及乳腺炎抗性的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、熱休克蛋白70（HSP70）作為分子伴侶在正常和應(yīng)激條件下對機(jī)體的生理機(jī)能發(fā)揮重要作用，它能參與細(xì)胞損傷的修復(fù)，異常聚集蛋白的解聚，對抗應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡等，對機(jī)體耐受各種不良環(huán)境因素有重要的作用。本研究以HSP70-1基因為候選基因，在全基因的編碼區(qū)尋找SNPs，并分析了SNPs與荷斯坦牛耐熱性及乳腺炎抗性的關(guān)系。主要研究內(nèi)容如下： ⑴根據(jù)NCBI登陸號為AY149618（19526bp）的HSP70-1基因序列設(shè)計九對引物并

2、用PCR-SSCP、PCR-RFLP和CRS-RFLP相結(jié)合的方法尋找中國荷斯坦牛HSP70-1基因編碼區(qū)的多態(tài)位點，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1623bp處發(fā)生G-A-C的突變，2409bp處發(fā)生G-A的突變；兩個突變位點勻為沉默突變，沒有改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列。X2檢驗結(jié)果表明兩位點均未達(dá)到Hardy-Weinberg平衡。2409位點多態(tài)信息含量為0.276，屬中度多態(tài)；1623位點為0.554，屬高度多態(tài)，兩位點多態(tài)信息含量較為豐富，具有作為分子

3、標(biāo)記的潛力。 ⑵以直腸溫度和紅細(xì)胞鉀離子濃度為荷斯坦牛的耐熱指標(biāo)，用SAS軟件最小二乘分析一般線性模型分析山東地區(qū)三個現(xiàn)代化牛場的127頭產(chǎn)奶牛HSP70-1基因型與耐熱指標(biāo)的相關(guān)性，結(jié)果表明2409處基因型與耐熱指標(biāo)相關(guān)性不顯著，1623bp處基因型與紅細(xì)胞鉀離子濃度相關(guān)性不顯著，而與熱應(yīng)激時期中國荷斯坦牛的直腸溫度相關(guān)性顯著（P<0.05），GA基因型個體顯著低于CC和GG基因型個體，GA基因型為耐熱基因型。說明HSP70-

4、1基因的1623位點可用作中國荷斯坦牛選育耐熱牛群的分子遺傳標(biāo)記。 ⑶隨機(jī)采取天津?qū)嶒炁龅?53個血樣，這些樣本有完整的DHI數(shù)據(jù)汜錄。其中SCC（Somaic Cell Count體細(xì)胞計數(shù)）被證明和乳腺炎的發(fā)生有很高的相關(guān)性。由SCC轉(zhuǎn)化而來的SCS（Somatic Cell Score體細(xì)胞評分）因為數(shù)值符合正態(tài)分布，在統(tǒng)計應(yīng)用中比SCC更有優(yōu)勢。采用SAS8.2軟件對各實驗牛群體的HSP70-1基因型與SCS的相關(guān)性進(jìn)

5、行分析，結(jié)合本實驗實際建立最小二乘擬合線性模型，分析HSP70-1基因型、環(huán)境、胎次和季節(jié)等對SCS的影響；結(jié)果證明場次和胎次對SCS影響極顯著（P<0.01），產(chǎn)犢季節(jié)和1623位點基因型對SCS影響顯著（P<0.05），2409bp位點對SCS影響不顯著（P>0.05）；1623bp位點不同基因型SCS差異顯著，CC基因型明顯低于GA、GG基因型，其它基因型之間差異不顯著，CC基因型可初步判定為乳房炎抗性基因型；1623位點可以作為