甘丙肽對離體海馬神經(jīng)細胞損傷模型的保護作用研究.pdf

1、本實驗通過運用離體培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細胞，觀察過氧化氫(H2O2)和谷氨酸(Glu)對海馬神經(jīng)細胞的損傷效應(yīng)及GAL在海馬神經(jīng)細胞損傷過程中的保護作用，并初步探討這種作用的產(chǎn)生機理。實驗共分為三部分：　　第一部分，選取新生大鼠分離雙側(cè)海馬細胞進行培養(yǎng)，并通過阿糖胞苷(Ara-C)處理得到較純的海馬神經(jīng)細胞。用免疫組化ABC法對海馬神經(jīng)細胞特性進行鑒定并檢測GAL陽性神經(jīng)細胞，用RT-PCR方法來檢測GAL三種受體mRNA的表達?！　?/p>

2、第二部分，建立離體培養(yǎng)海馬神經(jīng)細胞的損傷模型。采用一系列濃度的過氧化氫和谷氨酸損傷海馬神經(jīng)細胞，通過MTT法檢測細胞的存活率?！　〉谌糠郑珿AL的保護作用。觀察GAL，GAL的激動劑GAL1-11、GAL2-¨對損傷細胞的作用。用GAL非特異性拮抗劑M35觀察其是否阻斷GAL及其激動劑的作用，并用Fura-2標(biāo)記細胞內(nèi)游離鈣的方法探討GAL可能的受體作用機制及胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑。 實驗結(jié)果： 1)經(jīng)過上述分離與純化細胞

3、的方法，我們成功地獲得能在體外穩(wěn)定生長的海馬神經(jīng)細胞。體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細胞表達GAL蛋白，并表達GAL受體GalR2和GalR3的mRNA，但不表達GalR1的mRNA。 2)H2O2濃度為0.2mM及以上劑量，Glu濃度為0.3mM以上劑量均能顯著降低海馬神經(jīng)細胞的存活率，并且隨著H2O2和Glu濃度的增加，細胞的存活率不斷降低。 3)各個濃度的GAL、GAL1-11和GAL2-11均能顯著提高海馬神經(jīng)細胞的存活率。

4、GAL非特異性受體拮抗劑M35能夠明顯拮抗GAL、GAL1-11和GAL2-11對海馬神經(jīng)細胞的這種作用。另外，GAL能顯著降低受損海馬神經(jīng)細胞內(nèi)的游離鈣離子濃度。 綜上所述，從新生SD大鼠的海馬分離純化得到了較純的海馬神經(jīng)細胞，利用這種細胞建立損傷模型，并研究GAL對細胞的保護作用。結(jié)果說明GAL能提高海馬神經(jīng)細胞在H2O2和Glu損傷中的存活率，并且這種作用能被其拮抗劑所阻斷。此外，海馬神經(jīng)細胞表達受體GalR2和GalR3