環(huán)孢素A對正常人PBMCs產(chǎn)生IFN-γ的抑制作用及其機制的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩48頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、環(huán)孢素A(cyclosporinA,CsA)是一種傳統(tǒng)的免疫抑制劑。自從CsA于二十世紀七十年代末廣泛應用于器官和組織移植后的抗排斥反應治療以來,影響病人生存率的急性排斥反應和早期免疫抑制劑嚴重負作用已經(jīng)大大地降低,腎、肝、心、胰腺、肺和小腸的同種異體移植取得了巨大的進展[1-3]?,F(xiàn)今,CsA仍然是器官移植成功的關鍵因素,世界上有數(shù)十萬器官移植患者依靠CsA維持生命,正在進行的聯(lián)和CsA作為核心免疫移植方案的試驗,旨在為優(yōu)化CsA的應

2、用和提高移植患者臨床結(jié)果提供最新的方案[4-7]。近年來,CsA用于治療銀屑病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、實驗性過敏性腦脊髓膜炎等自身免疫性疾病,成為治療多種自身免疫反應性疾病的常規(guī)用藥[8-10]。目前,在體內(nèi)外對CsA的免疫抑制作用進行了廣泛的研究,CsA抑制IL-2的產(chǎn)生和CTL的活性的能力,主要通過干擾T-淋巴細胞的信息傳遞通道而抑制其功能[10-13]。 CsA是一個由11種氨基酸組成的肽,CsA發(fā)揮免疫抑制作用是通過與富含于胞

3、漿內(nèi)的CsA受體(cyclophilin,CyP)相互作用并抑制鈣調(diào)磷酸酶(calcineurin,CN)分子而完成。CsA與CyP形成CyP/CsA復合物,作用于鈣調(diào)磷酸酶(calcineurin,CN)分子,使CN去磷酸化作用被阻斷。在T細胞活化過程中,CN對轉(zhuǎn)錄因子NF-NT的調(diào)節(jié)起關鍵性作用。通過抑制CN的活性,CsA阻止了編碼細胞因子(IL-2,IFN-γ)和它們受體基因的誘導,細胞免疫和體液免疫被抑制。最終使機體免疫排斥作用

4、被抑制[14-17]。 除了作用于T細胞外,CsA對人體免疫系統(tǒng)中不同的細胞亞群,比如樹突狀細胞、NK細胞和B細胞亞群有著不同的影響[18-22]。通過抑制T細胞的活化,抑制細胞表面活化分子CD25、CD69的表達[23-25]。并且抑制細胞因子IL-2,IL-4,IFN-γ等的產(chǎn)生[26-27]。抑制樹突狀細胞的分化,抑制IL-12、IL-6等細胞因子的產(chǎn)生。 器官移植和自身免疫性疾病的免疫學機制的主要共同點是由細胞免

5、疫所介導的免疫應答參與,包括Th1細胞和CD8+T細胞??乖岢始毎a(chǎn)生的細胞因子IL-12,可以誘導Th1細胞和CD8+T細胞的分化,CD4+和CD8+T細胞的增殖以及增加細胞因子IFN-γ和TNF-α的產(chǎn)生,因此促進了細胞免疫功能[28,29]。體內(nèi)外的研究證明,當IL-12和/或IFN-γ被抑制、基因被敲除或基因突變后,細胞免疫下降,某些自身免疫性疾病得以控制[30-34],移植物的存活時間延長[35-38]。 CsA對

6、細胞免疫作用機制還不是十分明確,因此我們從細胞免疫角度上,研究CsA對不同的細胞亞群的細胞因子的分泌及細胞活化分子的表達。進一步揭示CsA的作用機制,為臨床應用CsA提供了理論依據(jù)。 目的探討在不同刺激條件下,CsA對正常人外周血單個核細胞(PBMCs)γ-干擾素(interferon-gamma,IFN-γ)產(chǎn)生的作用,及其作用機制的研究。 方法(1)密度梯度離心法分離正常人PBMCs,在CsA存在或不存在的情況下,用

7、抗CD3單克隆抗體(anti-CD3)、anti-CD3和抗CD28(anti-CD28)單克隆抗體、細胞因子IL-12或在混合淋巴細胞反應(MLC)中刺激培養(yǎng)細胞,用ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ產(chǎn)生的量,觀察CsA對對IFN-γ產(chǎn)生的影響。在CsA存在或不存在的情況下,anti-CD3或MLC刺激培養(yǎng)細胞后,收集細胞,加入不同濃度IL-12,用ELISA方法檢測兩次培養(yǎng)上清中IFN-γ產(chǎn)生的量,觀察CsA對Th1細胞分化的影

8、響。 (2)在CsA存在或不存在的情況下,anti-CD3刺激培養(yǎng)細胞后,使用流式細胞儀,在單個細胞水平上評價CsA對T淋巴細胞表面活化分子CD25、細胞表面分子IL-12R及細胞內(nèi)細胞因子IFN-γ和IL-2產(chǎn)生的影響。 結(jié)果(1)正常人PBMCs在未經(jīng)任何刺激的情況下不產(chǎn)生IFN-γ,anti-CD3、anti-CD3和anti-CD28或MLC刺激后產(chǎn)生大量的IFN-γ,在刺激的同時加入CsA,CsA呈劑量依賴性抑

9、制IFN-γ的產(chǎn)生。 (2)PBMCs經(jīng)anti-CD3或anti-CD3和不同濃度的IL-12培養(yǎng)3d,IL-12能增強anti-CD3刺激后PBMCs產(chǎn)生IFN-γ的量。 (3)在CsA有效抑制anti-CD3和MLC產(chǎn)生IFN-γ的情況下,預先用CsA處理的細胞與未處理組相比,IL-12誘導IFN-γ的量顯著減少。 (4)細胞內(nèi)細胞因子染色的結(jié)果表明,CsA不僅抑制CD4+和CD8+T細胞IFN-γ產(chǎn)生細胞

10、的百分率,同時還抑制IFN-γ的表達密度。CsA抑制CD4+IL-2產(chǎn)生細胞的百分率。 (5)Anti-CD3刺激PBMCs3d后,CD4+T細胞(12.30%)和CD8+T(5.15%)細胞均表達CD25,CsA抑制CD4+(7.77%)和CD8+(1.64%)T淋巴細胞CD25分子的表達百分率。 (6)當anti-CD3刺激PBMCs3d后,CD4+和CD8+T細胞表達IL-12Rβ1和IL-12Rβ2均增高,CsA

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論