AICAR和Compound C減輕內(nèi)毒素血癥肝臟損傷的作用與機(jī)制.pdf

1、背景:
　　內(nèi)毒素血癥具有高死亡率和治愈率低的特點(diǎn)，因而在臨床工作中被認(rèn)為是十分棘手的問題。當(dāng)前認(rèn)為感染，外科創(chuàng)傷，燒傷，腸道細(xì)菌移位等是誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)毒素血癥的主要因素。LPS作為細(xì)菌誘導(dǎo)內(nèi)毒素血癥最主要的成分，可激活機(jī)體非特異性免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)大量的促炎細(xì)胞因子及趨化因子的產(chǎn)生，造成多器官功能損傷和障礙，尤其是肝臟組織的損傷和功能障礙。近來，AICAR作為AMPK的特異激活劑應(yīng)用于研究結(jié)腸炎，哮喘等動(dòng)物模型并發(fā)現(xiàn)AMPK通路表現(xiàn)

2、抑制炎癥反應(yīng)的作用。然而，激活或抑制AMPK通路可否抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)紊亂和肝臟損傷還有待闡明。
　　目標(biāo):
　　研究AMPK激活劑AICAR和抑制劑Compound C對于LPS誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷模型的作用。
　　方法:
　　(1)體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，經(jīng)AICAR和/或Compound C刺激后western blot檢測p-AMPK的表達(dá)。
　　(2)將RAW264.7巨噬細(xì)胞分為5

3、組，對照組，LPS組(LPS100ng/ml)，LPS+AICAR組(AICAR1mM預(yù)處理RAW264.7巨噬細(xì)胞1h后加入LPS100ng/ml)，LPS+Compound C組（Compound C50μM預(yù)處理RAW264.7巨噬細(xì)胞1h后加入LPS100ng/ml），及LPS+AICAR+Compound C組（AICAR1mM與Compound C50μm預(yù)處理RAW264.7巨噬細(xì)胞1h后加入LPS100ng/ml）。1h

4、后western blot檢測p-NF-κB p65的表達(dá)。
　　(4) BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組:對照組（腹腔注射生理鹽水）LPS組(腹腔注射LPS2mg/kg)，LPS+AICAR組(腹腔注射AICAR500mg/kg1h后注射LPS2mg/kg)，LPS+Compound C組(腹腔注射Compound C20mg/kg1h后注射LPS2mg/kg)，LPS+AICAR+Compound C組（腹腔注射AICAR500m

5、g/kg及Compound C20mg/kg1h后注射LPS2mg/kg）。LPS注射12h后處死小鼠，取小鼠血清及肝臟組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
　　(5)小鼠生存率實(shí)驗(yàn):BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組（按之前方法分組，LPS腹腔注射量為20mg/kg，AICAR及Compound C注射量同上），24小時(shí)內(nèi)觀察各組小鼠的生存情況。
　　結(jié)果:
　　(1) AICAR可促進(jìn)巨噬細(xì)胞AMPK磷酸化，Compound C可阻斷AI

6、CAR激活A(yù)MPK磷酸化。AICAR及Compound C均可抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞NF-κB活化。
　　(2) LPS可誘導(dǎo)小鼠肝臟功能損傷，包括血清ALT、AST升高，血清TNF-a含量升高，肝臟組織病理損傷，誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，通過檢測CD68表達(dá)及肝臟MPO含量反應(yīng)出肝臟巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞活化程度。
　　(3) AICAR和Compound C治療LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥模型小鼠，均可以減少血清ALT、A