重組人生長(zhǎng)激素對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、革蘭陰性菌感染在臨床感染中占重要地位，其細(xì)胞壁外層的內(nèi)毒素是其主要毒性物質(zhì)，內(nèi)毒素及其主要成分脂多糖(LPS)可引起內(nèi)毒素血癥導(dǎo)致多種臟器損傷，進(jìn)一步可以形成全身炎癥綜合征(SIRS)、膿毒癥或多器官功能障礙綜合征(MODS)，這種狀況下使機(jī)體處于嚴(yán)重分解代謝狀態(tài)，導(dǎo)致蛋白凈生成率下降和負(fù)氮平衡并可因此而產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。因此，給予治療干預(yù)以逆轉(zhuǎn)分解代謝反應(yīng)是十分重要的。重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)已經(jīng)被用于在嚴(yán)重分解代謝病人中改善代謝狀態(tài)

2、的研究，病人的病情及預(yù)后均有明顯改善。但是也有資料顯示大劑量、長(zhǎng)療程的生長(zhǎng)激素可能與危重病人的死亡率和發(fā)病率的增加有關(guān)。一部分學(xué)者還認(rèn)為大劑量的rhGH可能有促炎的作用，但是小劑量的rhGH在炎癥性疾病的急性期是否能夠使用?其具體的作用機(jī)制是什么?目前研究還很少。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔內(nèi)注射內(nèi)毒素(脂多糖LPS)的方法制造內(nèi)毒素血癥大鼠模型。健康的SD大鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組(A組)、內(nèi)毒素血癥組(B組)及rhGH治療組(C組)。A組不作

3、任何特殊處理，B組及C組均一次性經(jīng)腹腔內(nèi)注射LPS(5mg／kg)，C組隨即予以皮下注射rhGH(n5／kg)，B組則注射相同容積的生理鹽水(約lml)。應(yīng)用生化檢查、免疫組化、RT-PCR等方法，動(dòng)態(tài)觀察：1．血漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、NO濃度及iNOS活力。2．肝臟中細(xì)胞信號(hào)因子傳導(dǎo)抑制體．1、3(SOCS．1、SOCS．3)、誘生型一氧化氮合酶(iNOS)、腫瘤壞死因子(TNF-α)及白細(xì)胞介素6(IL-6

4、)mRNA的表達(dá)。3．T13NEI法測(cè)定肝細(xì)胞的凋亡情況。4．測(cè)肝臟、小腸及肺中NF-κB的表達(dá)。另用培養(yǎng)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分為6組，用LPS(100μg／L)刺激，然后再分別用o.8μg／L、4.0μg／L_、20.0μg／L、loo.oμg／L的rhGH處理，觀察不同濃度rhGH對(duì)LPS刺激的巨噬細(xì)胞NO產(chǎn)生及iNOSmRNA表達(dá)的影響。本研究旨在了解rhGH對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠急性應(yīng)激期是否具有保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制。 小劑量

5、rhGH治療結(jié)果表明： (1)rhGH能夠明顯保護(hù)肝臟功能，減輕內(nèi)毒素血癥時(shí)的肝細(xì)胞的凋亡； (2)rhGH能夠減輕重要臟器肝、小腸、肺的損傷；(3)rhGH能夠抑制內(nèi)毒素刺激狀態(tài)下巨噬細(xì)胞的活化。 小劑量rhGH對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠具有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能是： (1)rhGH通過(guò)抑制肝臟iNOS mRNA的表達(dá)，減少了NO的產(chǎn)生，從而維護(hù)肝功，起到保護(hù)肝臟的作用。(2)rhGH在內(nèi)毒素血癥狀態(tài)下，誘導(dǎo)肝臟SOCS．1、

6、SOCS-3 mRNA的高表達(dá)，盡管可能導(dǎo)致機(jī)體對(duì)GH的不敏感，但在一定程度上也通過(guò)負(fù)反饋的機(jī)制抑制了炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，維護(hù)了炎癥調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的相對(duì)平衡。(3)rhGH能夠在內(nèi)毒素血癥狀態(tài)下，抑制肝細(xì)胞的凋亡，保護(hù)肝臟。 (4)rhGH通過(guò)減少腸、肝、肺組織的NF-κB的活化程度，在基因轉(zhuǎn)錄水平影響了TNF-α、IL-6、NO等多種促炎因子的轉(zhuǎn)錄。 (5)rhGH還能夠抑制內(nèi)毒素刺激后的巨噬細(xì)胞iNOSmRNA的表達(dá)，減少NO等炎癥介質(zhì)的