IKK-NF-κB通路在肝臟缺血再灌注復(fù)合內(nèi)毒素血癥損傷中的作用及PDTC的保護(hù)機(jī)制.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)試圖從與NF-κB活化最密切的IKK-β入手,進(jìn)一步探討PDTC的抗炎機(jī)理.該實(shí)驗(yàn)通過(guò)HIR和內(nèi)毒素(ET)雙重打擊制備大鼠急性肝臟損傷(ALI)模型,觀察肝臟組織中IKK-β的表達(dá)、NF-κB的活化情況以及NF-κB的下游因子TNF-α及IL-6的表達(dá),探討IKK-β、NF-κB在HIR致ALI的病理機(jī)制中的作用;同時(shí)觀察PDTC對(duì)ALI的保護(hù)作用,從分子水平探討PDTC的抗炎機(jī)理,以證實(shí)干預(yù)IKK-NF-κB信號(hào)通路可能是防止

2、HIR后ALI的發(fā)生發(fā)展一個(gè)有效的途徑,為臨床HIR后ALI的預(yù)防和治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).方法:試驗(yàn)選擇Wister大鼠隨機(jī)分為:對(duì)照組(A組);HIRE組(B組);HIRE+PDTC組(C組).每組20只.手術(shù)方法:采用乙醚吸入麻醉,腹部正中切口,顯露肝左葉及肝中葉肝動(dòng)脈和門(mén)靜脈.B組用無(wú)損傷動(dòng)脈夾阻斷肝左葉及肝中葉之入肝血流,缺血時(shí)間為1h,阻斷開(kāi)放時(shí)自陰莖背靜脈注射大腸桿菌脂多糖(LPS)2.5 mg·kg<'-1>;C組先經(jīng)陰莖背靜

3、脈注射PDTC 120 mg·kg<'-1>后立即依B組方法致傷;A組僅行腹部正中切口,顯露肝中葉及肝左葉肝蒂,不阻斷,陰莖背靜脈注射無(wú)菌生理鹽水1ml.分別于再灌注后1,3,6,12h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物,取材(每時(shí)間點(diǎn)5只).分別采用原位雜交(ISH)、非變性凝膠遷移電泳(EMSA)及免疫組化(IH)法檢測(cè)肝臟組織中IKK-β表達(dá)、NF-κB活性、TNF-α及IL-6的表達(dá),并檢測(cè)血漿中ALT含量,蘇木精-伊紅(HE)染色光學(xué)顯微鏡下

4、觀察肝臟組織病理變化.結(jié)論:(1)機(jī)體受到HIR和ET刺激后,可增加IKK-β的表達(dá),促進(jìn)NF-κB的活化和核移位,從而上調(diào)TNF-α的基因轉(zhuǎn)錄;TNF-α作為細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的啟動(dòng)因子,進(jìn)一步引起IL-6等一系列炎癥介質(zhì)的繼發(fā)性釋放,誘發(fā)ALI.說(shuō)明IKK-β是肝臟缺血再灌注損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié);TNF-α在炎癥瀑布反應(yīng)的啟動(dòng)中發(fā)揮重要作用,IL-6在組織炎性損傷過(guò)程中具有重要作用.(2)PDTC的抗炎作用機(jī)理可能是通過(guò)減少IKK-β的表達(dá),下