高糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠Leydig細(xì)胞凋亡.pdf

1、精神和心理因素對(duì)人體健康的影響已是不爭的事實(shí)。在現(xiàn)代社會(huì)中，超負(fù)荷的工作或?qū)W習(xí)的壓力及其它各種因素正日益對(duì)人類的健康構(gòu)成威脅。體內(nèi)的糖皮質(zhì)激素水平過度升高常常是機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)的標(biāo)志。大量的研究表明，長期過度的應(yīng)激或巨大的精神壓力會(huì)影響男性生殖功能。睪丸Leydig細(xì)胞(Leydig cell，LC)的主要功能是合成和分泌雄激素，其中睪酮是調(diào)節(jié)雄性生理功能最重要的激素。睪酮分泌不足將會(huì)導(dǎo)致一系列雄性生理功能異常。垂體分泌的間質(zhì)細(xì)胞刺激素

2、(LH)是調(diào)節(jié)Leydig細(xì)胞合成和分泌睪酮的主要因子。然而，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，腎上腺皮質(zhì)分泌的糖皮質(zhì)激素(大鼠體內(nèi)的糖皮質(zhì)激素是皮質(zhì)酮)通過抑制Leydig細(xì)胞中睪酮合成酶的活性和合成，導(dǎo)致睪酮合成量減少。已知體內(nèi)的睪酮水平，除了與單個(gè)Leydig細(xì)胞合成睪酮的能力(指Leydig細(xì)胞中參與睪酮合成的酶的活性)相關(guān)外，還取決于Leydig細(xì)胞的數(shù)量，即；糖皮質(zhì)激素還可通過控制睪丸中Leydig細(xì)胞的數(shù)量來影響體內(nèi)的睪酮合成水平。由于細(xì)

3、胞凋亡是影響細(xì)胞數(shù)量的重要因素，毫無疑問，Leydig細(xì)胞凋亡亦可導(dǎo)致睪酮水平下降。本研究采用應(yīng)激大鼠作為動(dòng)物模型，觀察應(yīng)激是否會(huì)導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡？應(yīng)激導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡是否糖皮質(zhì)激素直接作用的結(jié)果及其機(jī)制。本研究分為兩個(gè)部分： 第一部分,觀察應(yīng)激能否通過誘導(dǎo)大鼠Leydig細(xì)胞凋亡，減少細(xì)胞數(shù)目，使睪酮合成和分泌量下降？對(duì)成年雄性SD大鼠進(jìn)行連續(xù)21天的應(yīng)激處理(捆綁倒掛、低溫、足底電擊、冰水游泳)建立應(yīng)激大鼠模

4、型。其次是采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定應(yīng)激大鼠血清中皮質(zhì)酮和睪酮改變情況。最后，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)和電鏡技術(shù)檢測(cè)應(yīng)激大鼠Leydig細(xì)胞凋亡情況。與對(duì)照組血清皮質(zhì)酮水平(50±3ng/mL)、睪酮水平(5.8±0.2ng/mL)相比，應(yīng)激大鼠血清中的皮質(zhì)酮水平(110±5 ng/mL)呈顯著升高(P<0.01)，睪酮量(3.0±0.1 ng/mL)則顯著降低(P<0.01)；流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組凋亡率(2.3±1％)相比，應(yīng)激大鼠Leydig細(xì)

5、胞凋亡率(17.8±0.8％)顯著增加(P<0.01)；電鏡分析表明，應(yīng)激大鼠的Leydig細(xì)胞呈現(xiàn)皺縮和核染色質(zhì)濃縮、邊集等典型的凋亡早期的形態(tài)學(xué)改變，上述表明：應(yīng)激可以導(dǎo)致大鼠Leydig細(xì)胞凋亡。 第二部分,研究應(yīng)激導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡是否糖皮質(zhì)激素直接作用的結(jié)果及其機(jī)制。由于應(yīng)激引起的大鼠體內(nèi)的內(nèi)分泌反應(yīng)不僅有糖皮質(zhì)激素的升高還有兒茶酚胺等其他內(nèi)分泌因子的改變。為評(píng)價(jià)由應(yīng)激導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡是否糖皮質(zhì)激素直接作

6、用的結(jié)果，在本文的第一部分已證實(shí)有關(guān)應(yīng)激確實(shí)可導(dǎo)致大鼠皮質(zhì)酮水平升高的前提下，作者首先觀察應(yīng)激大鼠Leydig細(xì)胞中糖皮質(zhì)激素受體(GR)的位置變化情況。其次是評(píng)價(jià)Leydig細(xì)胞內(nèi)GR表達(dá)量的改變與細(xì)胞凋亡率變化的相關(guān)性。以進(jìn)一步證實(shí)應(yīng)激導(dǎo)致大鼠Leydig細(xì)胞凋亡是皮質(zhì)酮直接作用的結(jié)果。其三是為了分析應(yīng)激導(dǎo)致的兒茶酚胺濃度升高是否參與Leydig細(xì)胞凋亡。最后，是評(píng)價(jià)應(yīng)激導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡的細(xì)胞信號(hào)通路。 研究表明：①

7、應(yīng)激可誘導(dǎo)Leydig細(xì)胞凋亡、減少Leydig細(xì)胞數(shù)目，導(dǎo)致睪酮合成和分泌減少。②應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠Leydig細(xì)胞凋亡是糖皮質(zhì)激素直接作用的結(jié)果。高糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的應(yīng)激誘導(dǎo)Leydig細(xì)胞凋亡的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制是經(jīng)死亡受體(FasL/Fas)觸發(fā)的。其證據(jù)包括：應(yīng)激大鼠體內(nèi)皮質(zhì)酮水平呈顯著升高；應(yīng)激大鼠Leydig細(xì)胞中GR呈現(xiàn)自胞漿到胞核的移位；GR表達(dá)量的改變與Leydig細(xì)胞凋亡率改變的呈顯著的相關(guān)性；應(yīng)激水平的兒茶酚胺未能增加Leyd