肺腺癌細(xì)胞中CNTN1和NrCAM介導(dǎo)的RPTPβ信號通路的研究.pdf

1、在工業(yè)化國家中，肺癌死亡率依舊很高，而腫瘤細(xì)胞遷移是導(dǎo)致死亡的重要原因，但其機制仍舊未知。在神經(jīng)細(xì)胞中，NrCAM與CNTN1形成一個異二聚體并通過影響受體蛋白酪氨酸磷酸酶RPTPβ介導(dǎo)神經(jīng)突的生長。RPTPβ在神經(jīng)細(xì)胞中主要表現(xiàn)為影響細(xì)胞增殖、遷移和凋亡，已有研究證實RPTPβ在肺腺癌中具有相同作用和功能。CNTN1也能在肺腺癌中表達(dá)，并加速細(xì)胞的侵染。
　　本文主要目的是證明在肺腺癌細(xì)胞中存在CNTN1和NrCAM異二聚體介導(dǎo)

2、的RPTPβ通路，并且這一通路具有調(diào)控肺腺癌細(xì)胞遷移的能力。我們用WesternBlot的方法驗證了CNTN1和NrCAM這兩個基因在肺腺癌細(xì)胞中的特異性表達(dá)。在這個基礎(chǔ)上，采用免疫共沉淀的方法對這三種蛋白的相互關(guān)系進(jìn)行研究。經(jīng)CO-IP，我們確定了這三種蛋白之間確實存在相互作用，在體內(nèi)是相互結(jié)合的。在確定了三者之間的結(jié)構(gòu)關(guān)系后，又將RNA干擾技術(shù)應(yīng)用于這三種基因功能關(guān)系的研究。通過構(gòu)建和篩選細(xì)胞株CNTN1-shRNA A549細(xì)胞和

3、NrCAM-shRNAA549細(xì)胞，檢測RPRPβ底物的表達(dá)。經(jīng)過對RPTPβ底物的Western Blot檢測，發(fā)現(xiàn)在分別抑制了CNTN1和NrCAM基因以后，RPTPβ的活性也相應(yīng)的受到了抑制。隨后，細(xì)胞劃痕實驗用來驗證在兩種基因被抑制后，RPTPβ活性也相應(yīng)降低的CNTN1-shRNA A549細(xì)胞和NrCAM-shRNA A549細(xì)胞是否存在細(xì)胞遷移能力的差異。實驗證明這兩種細(xì)胞的遷移能力明顯降低。
　　此外，在本課題中成

4、功構(gòu)建pCDNA3.1-CNTN1和pCDNA3.1-NrCAM，將他們轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞中，以空白pCDNA3.1質(zhì)粒作為對照，但是，很遺憾，我們只能篩選到轉(zhuǎn)入對照質(zhì)粒的細(xì)胞，另外兩種轉(zhuǎn)染細(xì)胞在篩選過程中均經(jīng)過變形后死亡，為本課題增加了更多探索的可能。同時，本課題驗證了PTN對RPTPβ的作用，在以前的報道中PTN做為RPTPβ的抑制劑存在，但是，在本課題中,RPTPβ因為PTN的加入而表達(dá)增加，同樣的現(xiàn)象也在293T細(xì)胞中存在。