應(yīng)用基因芯片技術(shù)對ADPKD進(jìn)行基因診斷.pdf

1、目的：常染色體顯性遺傳性多囊腎病(ADPKD)是最常見的。腎臟遺傳病之一，發(fā)病率1/400-1/1000，約占終末期腎功能衰竭(End Stage Renal Disease，ESRD)病因的l/10。引起ADPKD的基因至少有三種：多囊腎病基因l(PKDl)，多囊腎病基因2(PKD2)，及多囊腎病基因3(Tg737)。其中PKDl基因突變致病占85％，且癥狀最為嚴(yán)重，為主要致病基因。PKDl基因定位于16號染色體短臂1區(qū)3帶3亞帶(1

2、6p13.3)，由46個外顯子組成，其產(chǎn)物多囊蛋白PCI參與了多囊腎的發(fā)病機(jī)制。鑒于現(xiàn)有的各種治療方法只是能延緩患者進(jìn)入ESRD，而不可能逆轉(zhuǎn)疾病惡化的趨勢，所以及早產(chǎn)前診斷并適時(shí)終止妊娠，降低ADPKD的發(fā)病率顯得尤為重要傳統(tǒng)的基因診斷方法存在技術(shù)復(fù)雜效率低、精確度差的問題，基因芯片具有高通量、高效率等特點(diǎn)，它的出現(xiàn)給我們提供了一種便捷診斷手段。本實(shí)驗(yàn)對應(yīng)用該種方法進(jìn)行ADPKD基因診斷做了探索。 方法：調(diào)查一個檢出突變(C1

3、2217T)的患者的家系，繪制家系圖，盡可能采集家系與先證者有血緣關(guān)系的成員的外周血樣，提取患者基因組DNA，對含有突變的目的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增及目的基因片段的克隆、測序，驗(yàn)證突變可靠性。進(jìn)行家系成員DNA目的片斷的PCR擴(kuò)增，點(diǎn)樣于基因芯片，設(shè)計(jì)探針與之雜交，激光共聚焦顯微鏡讀取信息，根據(jù)雜交信號經(jīng)計(jì)算機(jī)分析對家系患病情況作出診斷。 結(jié)果：驗(yàn)證了在先證者DNA中檢出的突變用于診斷的有效性，在對家系中所有目前已知的患者的樣本進(jìn)行

4、目的片段的測序表明均含有突變位點(diǎn)。成功的對目的片段進(jìn)行了質(zhì)?？寺。瑴y序驗(yàn)證了含突變的質(zhì)粒和野生型質(zhì)粒。通過芯片雜交判對結(jié)果，3名經(jīng)臨床診斷的患者均檢出突變，另有9名家系成員為尚未有臨床表現(xiàn)的突變攜帶者。在未患病家系成員的子女中和陰性對照的個體均未檢出突變。 結(jié)論：驗(yàn)證了無義突變(C12217T)在該家系中的致病性；突變檢測技術(shù)是ADPKD最為準(zhǔn)確的基因診斷技術(shù)；基因芯片技術(shù)在檢測突變進(jìn)行基因診斷時(shí)，具有快捷、敏感性和可靠性高的特點(diǎn)