Cyclin G2在乳腺病變中的表達(dá)及其對(duì)MCF-7細(xì)胞的作用.pdf

1、目的：腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞增殖失控、分化障礙及凋亡受阻密切相關(guān)，近年來(lái)與細(xì)胞增殖、凋亡有關(guān)的周期蛋白成為研究癌癥發(fā)生的熱點(diǎn)之一。細(xì)胞周期蛋白G2(cyclin G2)是新發(fā)現(xiàn)的周期蛋白G家族成員之一，與傳統(tǒng)周期蛋白促進(jìn)細(xì)胞增殖不同，其功能主要是抑制細(xì)胞周期的進(jìn)程，甚至使細(xì)胞進(jìn)入凋亡過(guò)程。目前關(guān)于cyclin G2在乳腺病變中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的作用還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究： (1)cyclin G2在乳腺病變中的表達(dá)及意

2、義， (2)探討cyclin G2對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞體外增殖的作用。 材料與方法：采用：(1)免疫組織化學(xué)染色(S-P法)，觀察Cyclin G2在人乳腺不同病變組織中的蛋白表達(dá)情況。(2)通過(guò)培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞HK-2，獲取總RNA，采用RT-PCR技術(shù)和基因克隆技術(shù)構(gòu)建pDsRed2-Cyclin G2融合基因。(3)以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pDsRed2-Cyclin G2融合基因至人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞中，熒光顯微鏡下觀

3、察其蛋白在MCF-7中的表達(dá)和定位；并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Cyclin G2對(duì)MCF-7細(xì)胞的作用。 結(jié)果：(1)Cyclin G2在正常乳腺組織、乳腺增生癥、導(dǎo)管內(nèi)癌(DCIS)以及浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為90％、86.66％、56％、43.33％，CyclinG2在正常乳腺組織及乳腺增生癥中的陽(yáng)性表達(dá)率與表達(dá)強(qiáng)度均無(wú)差異(P>0.05)：Cyclin G2在正常乳腺及乳腺增生組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于在DCIS

4、中的表達(dá)(P<0.05)，顯著高于在IDC中的表達(dá)．(P<0.01)，表達(dá)強(qiáng)度也顯著高于DCIS和IDC中的表達(dá)強(qiáng)度(P<0.01)； Cyclin G2在DCIS與IDC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)明顯差異(P>0.05)，但其表達(dá)強(qiáng)度顯著高于在IDC中的表達(dá)(P<0.01)。CyclinG2在IDC(LN+)、IDC(LN-)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為34.29％、56％，在IDC(LN+)組中的陽(yáng)性表達(dá)率低于IDC(LN-)組(P<0.05)，而

5、表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯差異(P>0.05)?？偟膩?lái)說(shuō)Cyclin G2在正常乳腺中有表達(dá)，在乳腺增生癥中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度與正常乳腺組織相當(dāng)，而在DCIS和IDC中的陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度逐漸下降。 (2)培養(yǎng)細(xì)胞HK-2，采用RT-PCR技術(shù)，獲得了人類(lèi)Cyclin G2的cDNA(525bp)。 (3)采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建了pDsRed2-Cyclin G2融合基因，通過(guò)PCR技術(shù)、酶切反應(yīng)，證實(shí)其插入的片段與預(yù)知的相符。

6、其融合蛋白在MCF-7細(xì)胞中的定位主要表現(xiàn)為彌漫性地分布在細(xì)胞核和細(xì)胞漿。(4)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pDsRed2-Cyclin G2于MCF-7細(xì)胞中，于48h后收集細(xì)胞，Annexin V-FITC染色和FCM檢測(cè)，結(jié)果顯示部分MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡，F(xiàn)CM檢測(cè)結(jié)果顯示其細(xì)胞凋亡率為54.23％，高于未轉(zhuǎn)染組(0.21％)及轉(zhuǎn)空質(zhì)粒pDsRed2-N1組(27.16％)(p<0.01)。 結(jié)論：(1)人正常乳腺組織中存在Cyclin