TIF1-γ減低腎小管上皮細胞對TGFβ抑制增殖效應敏感性的研究.pdf

1、目的：利用RNA干擾技術,封閉轉錄中介因子1-γ( transcriptional intermediary factor1γ, TIF1-γ)在腎小管上皮細胞(HKC)中的表達,外源性的加入TGF-β或/及TGF-β受體酶抑制劑(SB431542),探討 TIF1-γ在轉化生長因子β( transforming growth factor-β,TGF-β)誘導的腎纖維化中的作用。
　　方法：構建能表達針對TIF1-γ的小干擾RN

2、A(siRNA)的慢病毒載體,以及表達不針對任何已知mRNA的siRNA的陰性對照載體,分別感染人腎小管上皮細胞株(HKC),得到 TIF1-γ表達受抑制的HKC- siTIF1-γ和TIF1-γ表達未受影響的HKC-siControl。將培養(yǎng)的細胞分為3組:正常 HKC組,HKC-siTIF1-γ組及HKC-siControl組,然后加入外源性的TGF-β或/及SB431542,72h后,分別采用四唑鹽(MTT)比色法實驗和weste

3、rn blot檢測,并分析TIF1-γ在TGF-β抑制腎小管上皮細胞增殖效應中的作用。
　　結果：沒有加入 TGF-β時,三組細胞生長活力差異不大,當只加入 TGF-β,三組細胞生長活力均受到明顯抑制,同時加入 TGF-β及SB431542時,三組細胞生長活力略有抑制。并且正常HKC組和HKC-siControl組中TIF1-γ正常表達, TGF-β抑制腎小管上皮細胞增殖的作用相當,但在HKC-siTIF1-γ組中TIF1-γ的表

4、達受到明顯抑制,幾乎不表達時,TGF-β抑制腎小管上皮細胞增殖的作用比正常HKC組和HKC-siControl組要強很多,差異具有統(tǒng)計學意義。換另一種方式來解釋就是,因為 TIF1-γ的表達,腎小管上皮細胞對 TGF-β抑制增殖效應的敏感性降低。TIF1-γ的表達和TGF-β抑制腎小管上皮細胞增殖效應呈顯著負相關。
　　結論：TIF1-γ的表達明顯減低HKC對TGFβ抑制增殖效應的敏感性,提示TIF1-γ在TGF-β誘導的腎纖維化