高血壓基因組掃描及去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、緩激肽β2受體基因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的研究.pdf

1、背景和目的：
　　 高血壓是嚴(yán)重危害人類健康的常見復(fù)雜疾病之一，已成為世界范圍的重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。在我國(guó)其發(fā)病率高、致殘率高、致死率也高，是腦卒中、冠心病的危險(xiǎn)因素。目前認(rèn)為，高血壓是多種遺傳因素和環(huán)境因素以及基因-基因間，基因-環(huán)境間相互作用的結(jié)果，具有遺傳異質(zhì)性，延遲顯性及種族差異等特征。研究表明血壓變異的30％-50%受到遺傳因素的影響[1]，而這些遺傳因素包括多個(gè)基因的作用，每個(gè)基因的作用可能是微效的。如果能對(duì)高血壓相

2、關(guān)基因多態(tài)性與高血壓的相關(guān)性進(jìn)行研究，確定與高血壓相關(guān)的位點(diǎn)，就可以通過(guò)基因分子生物學(xué)等方法對(duì)高血壓及其相關(guān)疾病采取早預(yù)防早診斷和早治療等措施，對(duì)患者、患者家庭及社會(huì)都具有極重要的意義。
　　 一般認(rèn)為微效基因作用模式在原發(fā)性高血壓(EH)的遺傳機(jī)制中起主要作用，即來(lái)自多個(gè)位點(diǎn)的大多數(shù)風(fēng)險(xiǎn)等位基因在群體中的發(fā)生頻率都很低，它們之間通過(guò)數(shù)量性狀的劑量-效應(yīng)關(guān)系進(jìn)行相互作用，達(dá)到疾病發(fā)生的臨界閾值，共同決定EH的遺傳易感性。目前對(duì)高

3、血壓遺傳研究尚無(wú)既定的方法模式，其中主要的幾種策略如候選基因克隆、定位候選基因克隆與全基因組掃描、中間表型、動(dòng)物模型及比較基因組學(xué)等。
　　 EH相關(guān)的基因多存在于腎素-血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、交感神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)皮系統(tǒng)和某些信號(hào)通路等系統(tǒng)中。交感神經(jīng)反應(yīng)性增強(qiáng)與高血壓的形成密切相關(guān)。交感神經(jīng)系統(tǒng)基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn)之一。激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(KKS)是機(jī)體重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)，廣泛地存在于許多組織和器官中，

4、參與多種生理和病理生理過(guò)程，如心血管、腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)的功能調(diào)節(jié)，平滑肌收縮、葡萄糖代謝、細(xì)胞增殖、炎癥與疼痛及休克過(guò)程等。近年來(lái)特別是在心血管方面的研究進(jìn)展很快，許多臨床研究和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)已證實(shí)KKS具有強(qiáng)大的心血管保護(hù)作用，如調(diào)節(jié)血壓、抑制心肌肥厚的形成、減少缺血再灌注損傷和參與缺血預(yù)適應(yīng)形成。KKS對(duì)于增加腎血流及Na+排出具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)全基因組掃描篩查原發(fā)性高血壓的相關(guān)基因位點(diǎn)，并對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)的去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基

5、因及激肽釋放酶.激肽系統(tǒng)的緩激肽β2受體基因多態(tài)位點(diǎn)與高血壓的關(guān)系進(jìn)行分析，為高血壓的發(fā)病機(jī)制研究提供線索。
　　 研究方法：
　　 1、高血壓家系及對(duì)照組的采集、流行病學(xué)問(wèn)卷調(diào)查
　　 在遼寧省阜新地區(qū)篩選兩代或三代以上有高血壓的家系，在家系中選擇高血壓患者(SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，或兩周內(nèi)服降壓藥者)作為家系高血壓組(n=850)；在阜新地區(qū)收集年齡≥55歲，血壓<140/90mmH

6、g的非家系非高血壓健康人群作為對(duì)照組(n=380)，對(duì)兩組人群進(jìn)行流行病學(xué)問(wèn)卷調(diào)查。
　　 2、體格檢查
　　 對(duì)收集的研究對(duì)象進(jìn)行血壓、身高、體重、腹圍的測(cè)量。
　　 3、采外周血行實(shí)驗(yàn)室檢查及DNA提取
　　 對(duì)研究對(duì)象行外周血的采集，黃色生化管進(jìn)行血液生化檢查，紫色抗凝管行基因組DNA的提取。
　　 4、DNA濃度測(cè)定及DNA混合池構(gòu)建
　　 用nano-drop分光光度儀對(duì)已提取的

7、DNA進(jìn)行濃度測(cè)定，每份樣本分別抽取100ng，在高血壓組(可用樣本740份)和非家系非高血壓組(可用樣本361份)分別構(gòu)建DNA混合池14個(gè)。
　　 5、全基因組掃描
　　 采用Affymetrix SNP6.0芯片(上海晶泰生物技術(shù)有限公司)對(duì)DNA混合樣本行全基因組掃描，定位SNP位點(diǎn)。
　　 6、目的基因多態(tài)性分析
　　 用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，Sanger測(cè)序等方法對(duì)Affymetrix S

8、NP6.0芯片不包含的四個(gè)位點(diǎn)，即交感神經(jīng)系統(tǒng)的去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的rs1805067和rs2397771兩個(gè)SNP位點(diǎn)多態(tài)性及激肽釋放酶.激肽系統(tǒng)的緩激肽β2受體基因的rs1799722和rs1046248兩個(gè)SNP位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行測(cè)定，研究其與EH的關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、高血壓組收縮壓、舒張壓、體重指數(shù)、血肌酐和飲酒百分率高于對(duì)照組，年齡低于對(duì)照組，差異有顯著性；高血壓組總蛋白、白蛋白、TC、HDL

9、-C、LDL-C、TG、FPG和吸煙百分率均與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。
　　 2、高血壓組和對(duì)照組間有兩個(gè)位點(diǎn)rs4540261和rs9625367有顯著性差異P<10-5。
　　 3、去甲腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因rs1805067和rs2397771兩個(gè)位點(diǎn)經(jīng)PCR擴(kuò)增后電泳產(chǎn)物分別為640bp和437bp的目的基因片段。rs1805067(A/G)多態(tài)性在高血壓組G占100%，A占0%，在對(duì)照組G占100%，A占0%，兩組間沒(méi)

10、有差異(P>0.05)。rs2397771(C/G)多態(tài)性在高血壓組G占46.30%，C占53.70%，在對(duì)照組G占61.19%，C占39.81%，兩組間有顯著性差異(P<0.05)。
　　 4、緩激肽β2受體基因rs1799722和rs1046248兩個(gè)位點(diǎn)經(jīng)PCR擴(kuò)增后電泳產(chǎn)物分別為395bp和369bp的目的基因片段。rs1799722(C/T)多態(tài)性在高血壓組T占77.78%，C占22.23%，在對(duì)照組T占64.81%，

11、C占35.12%，兩組間有顯著性差異(P<0.05)。rs1046248(C/T)多態(tài)性在高血壓組C占100%，T占0%，在對(duì)照組C占100%，T占O%，兩組間沒(méi)有差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、遼寧省阜新地區(qū)EH發(fā)病可能與體重指數(shù)、飲酒有關(guān)，高血壓患者的腎臟功能損傷較早。
　　 2、遼寧省阜新地區(qū)EH可能與以下SNP位點(diǎn)有關(guān)：rs：4540261；rs：9625367。
　　 3、遼寧省