異病同證之肝陽(yáng)化風(fēng)證的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及PRX3在肝陽(yáng)化風(fēng)證的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:通過(guò)研究腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病肝陽(yáng)化風(fēng)證（異病同證）患者及健康人外周血的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，并進(jìn)行相關(guān)蛋白質(zhì)驗(yàn)證，以探討異病同證之肝陽(yáng)化風(fēng)證的分子本質(zhì)內(nèi)涵。 方法分別分離出腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病肝陽(yáng)化風(fēng)證各組患者及健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用二維凝膠電泳分離各組總蛋白質(zhì)，獲得差異表達(dá)蛋白質(zhì)，制備各組蛋白質(zhì)組表達(dá)圖譜，PDQuest軟件分析，并通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF）和數(shù)據(jù)庫(kù)

2、對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分析鑒定。選擇肝陽(yáng)化風(fēng)證有意義的蛋白進(jìn)行驗(yàn)證，采用逆轉(zhuǎn)錄.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)正常組及肝陽(yáng)化風(fēng)證組PRX3基因表達(dá)水平。 結(jié)果 1.建立了腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病四病之肝陽(yáng)化風(fēng)證患者及健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜；腦梗塞肝陽(yáng)化風(fēng)證組與健康對(duì)照組比較有21個(gè)相同表達(dá)的蛋白質(zhì)，17個(gè)差異蛋白表達(dá)，其中13個(gè)蛋白質(zhì)較健康對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，4個(gè)較健康對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，腦出血肝陽(yáng)化風(fēng)證

3、組與健康對(duì)照組比較有22個(gè)相同表達(dá)的蛋白質(zhì)，21個(gè)差異蛋白表達(dá)，其中18個(gè)蛋白質(zhì)較健康對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，3個(gè)較健康對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，帕金森病肝陽(yáng)化風(fēng)證組與健康對(duì)照組比較有23個(gè)相同表達(dá)的蛋白質(zhì)，20個(gè)差異蛋白表達(dá)，其中18個(gè)蛋白質(zhì)較健康對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，2個(gè)較健康對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，頸椎病肝陽(yáng)化風(fēng)證組與健康對(duì)照比較有17個(gè)相同表達(dá)的蛋白質(zhì)，15個(gè)差異蛋白表達(dá)，其中13個(gè)蛋白質(zhì)較健康對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，2個(gè)蛋白質(zhì)較健康對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，而四病的肝陽(yáng)化風(fēng)證

4、共有5個(gè)表達(dá)相同的蛋白質(zhì)，且表達(dá)均較健康對(duì)照組表達(dá)下調(diào)。鑒定出的蛋白質(zhì)根據(jù)涉及的功能進(jìn)行分類(lèi)：包括細(xì)胞骨架蛋白、代謝酶類(lèi)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、抗氧化蛋白、血液蛋白等。 2.差異蛋白驗(yàn)證結(jié)果：RT-PCR法證實(shí)PRX3在各組的表達(dá)水平與2-DE結(jié)果一致：與健康對(duì)照組表達(dá)比較，腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病四病的肝陽(yáng)化風(fēng)證PRX3表達(dá)量均明顯下調(diào)（p<0.05），而四病各組間PRX3表達(dá)無(wú)差異（p>0.05）。 結(jié)論

5、 1.初步建立了腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病肝陽(yáng)化風(fēng)證患者及健康人對(duì)照組的外周血單個(gè)核細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜。 2.腦出血，腦梗塞，頸椎病，帕金森病四病的肝陽(yáng)化風(fēng)證（異病同證）患者具有相同及差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，提示異病同證既有證的共同的物質(zhì)基礎(chǔ)（相同的蛋白質(zhì)表達(dá)），又有疾病本身不同的特點(diǎn)（差異蛋白質(zhì)表達(dá)）。 3.PRX3的RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與2-DE結(jié)果一致，提示蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)的準(zhǔn)確性，可靠性。 4.異病同證之肝