曲美他嗪對兔肺動脈高壓的血管內(nèi)皮功能及右心室功能的影響.pdf

1、目的:
　　 肺動脈高壓(PulmonaryHypertention，PH)是以病因尚未完全清楚的、肺動脈壓力進(jìn)行性增高和伴有肺小動脈發(fā)生阻塞為特征的，具有高致殘率、預(yù)后極差的惡性肺血管疾病。右心功能不全是指各種原因造成心肌損壞，致使心肌結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，導(dǎo)致右心室泵血功能降低，依賴于充盈壓升高來補(bǔ)償?shù)牟±頎顟B(tài)。肺動脈高壓的病理改變使得肺血管阻力進(jìn)行性升高及肺血管結(jié)構(gòu)重構(gòu)，后發(fā)展成為以循環(huán)系統(tǒng)疾病的癥狀為主要的臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者

2、最終以右心衰竭而死亡。本研究首先用野百合堿(Monocrotaline，MCT)誘導(dǎo)制備的兔PH、右心功能不全模型，然后選用脂肪酸β-氧化抑制劑曲美他嗪進(jìn)行干預(yù)，觀察兔的肺動脈壓力及右心室功能的改變，評價曲美他嗪對兔肺動脈高壓的血管內(nèi)皮功能及右心室功能的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為肺血管疾病及右心功能不全的治療提供新的靶點(diǎn)和靶方向。
　　 方法:
　　 選用普通級健康的新西蘭兔24只，隨機(jī)分為2組:①空白組（空白組，

3、n=12）②野百合堿組(PH組，n=12)。在相同的飼料及飼養(yǎng)條件下，采用彈丸式注射法以60mg/kg的劑量一次性給予PH兔的腹腔內(nèi)注射先將無水乙醇和生理鹽水按1∶5的比例混合后溶解的野百合堿，空白組用同樣的方法于腹腔內(nèi)一次性注射相同劑量的乙醇和生理鹽水的混合液。飼養(yǎng)4周末行心臟多普勒超聲檢查，測定三尖瓣返流速度v，根據(jù)肺動脈壓力=4V2+右房內(nèi)壓力以明確肺動脈高壓模型以及應(yīng)用脈沖多普勒法測定右室Tei指數(shù)以明確右心室功能不全模型是否制

4、作成功，然后將PH組再次隨機(jī)分為兩組:①模型組（對照組，n=6）②曲美他嗪組（實(shí)驗(yàn)組，n=6），然后對實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行藥物干預(yù)4周。實(shí)驗(yàn)組每天給予以5mg/kg的曲美他嗪，于30ml生理鹽水完全溶解后灌胃治療，而對照組每天給予生理鹽水30ml灌胃處理。于藥物干預(yù)后4周末終止實(shí)驗(yàn)，再次行心臟多普勒超聲檢查，測定三尖瓣返流速度v，根據(jù)肺動脈壓力=4V2+右房內(nèi)壓力計(jì)算對照組及實(shí)驗(yàn)組的肺動脈壓力，然后將兔麻醉，行氣管插管呼吸機(jī)生命支持，開胸后采用右

5、心耳入路測定各組平均右心室壓力，計(jì)算平均肺動脈壓力（mPAP），測壓結(jié)束后，取出雙肺組織，以生理鹽水蕩滌殘血，于10％甲醛溶液中固定48小時，然后經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色等制作病理切片，光鏡下觀察肺組織的病理學(xué)變化并攝片對比。取出心臟，剪去心房，分離右室室壁(RV)、左心室加室間隔(LV+IVS)，以生理鹽水蕩滌殘血，并以濾紙吸干后立即稱重，計(jì)算出RV/(LV+IVS)的比值即為右心室肥厚指數(shù)(RVHI)，以確定有無右心室重構(gòu)，后將右

6、室室壁于10％甲醛溶液中固定48小時，然后經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色等制作病理切片，光鏡下觀察心臟組織的病理學(xué)變化并攝片對比;同時，實(shí)驗(yàn)于第4周末、第8周末抽血各組兔耳緣靜脈血備用以測定血液中BNP、NO及ET-1水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、一般情況的觀察:空白組家兔精神佳，活動自如，反應(yīng)靈敏，飲食正常，PH組的兔于注射野百合堿1周后出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍，喜靜臥，飲食減少及MCT注射部位均見潰瘍;實(shí)驗(yàn)組于曲美他嗪治

7、療2周后可見精神好轉(zhuǎn)，活動增加，飲食較前明顯增加，刺激后反應(yīng)較前敏感。
　　 2、血流動力學(xué)的變化:注射MCT4周末，行心臟多普勒超聲檢查，PH組可見三尖瓣返流，測定三尖瓣返流速度，計(jì)算平均肺動脈壓力，PH組的肺動脈壓力(mmHg)為（32.72±1.53），PH組的mPAP均高于30mmHg，表明成功的建立了肺動脈高壓模型。PH組分為對照組及實(shí)驗(yàn)組后的肺動脈壓力(mmHg)分別為（32.73±1.48）（32.70±1.71）

8、，對照組與實(shí)驗(yàn)組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.982)。曲美他嗪藥物干預(yù)4周后行心臟多普勒超聲檢查，計(jì)算平均肺動脈壓力，對照組及實(shí)驗(yàn)組后的肺動脈壓力(mmHg)分別為(38.86±0.65)（38.09±0.55），與4周末的對照組的mPAP相比，mPAP進(jìn)一步升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);8周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，測定右心室壓力，記錄圖形，計(jì)算平均肺動脈壓力，空白組、對照組及實(shí)驗(yàn)組的壓力(mmHg)為(20.44土2.04)、(40.2

9、0±1.53)、(39.85±0.86)，與空白組相比，實(shí)驗(yàn)組的mPAP降低不明顯，仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組的mPAP雖有降低，但是不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 3、心臟右室Tei指數(shù):注射MCT后4周末，行心臟多普勒超聲檢查，計(jì)算心臟右室Tei指數(shù)，空白組、PH組的右室Tei指數(shù)分別為:(0.484±0.1196)、(0.598±0.1243)，PH組的右室Tei指數(shù)較空白組顯著升高(

10、P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明成功的建立了右心室功能不全模型。
　　 4、右心室肥厚指數(shù)(RVHI):8周末血流動力學(xué)測定結(jié)束后，稱重并計(jì)算右室肥厚指數(shù)，空白組、對照組及實(shí)驗(yàn)組分別為(0.3314±0.15846)、(0.4266±0.19754)、(0.3735±0.19657)，對照組RV/(LV+IVS)較空白組顯著升高(P＜0.05)實(shí)驗(yàn)組的RV/(LV+IVS)與空白組相比較時具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），但與

11、對照組相比時有顯著降低（P＜0.05）。
　　 5、肺組織形態(tài)學(xué)的觀察:肉眼下，空白組的肺組織呈灰紅色，柔軟無腫脹，無淤血，對照組及實(shí)驗(yàn)組的雙下肺均呈深紅色及均可見黑色壞死區(qū)，對照組黑色壞死區(qū)域明顯大于實(shí)驗(yàn)組;光鏡下，空白組的肺小血管管壁結(jié)構(gòu)清楚，管壁厚度正常;對照組的肺組織的肺小血管管壁明顯增厚，管腔明顯狹窄，甚至達(dá)到閉塞程度，管腔內(nèi)可見再通血管;管壁及血管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤;實(shí)驗(yàn)組較對照組管壁增厚程度較輕，管腔的面積較大

12、，管壁及血管周圍炎性細(xì)胞浸潤較輕。
　　 6、心臟組織形態(tài)學(xué)的觀察:肉眼下，與空白組相比，對照組的右室壁明顯增厚，實(shí)驗(yàn)組增厚不明顯。光鏡下，空白組可見心肌纖維呈束狀、排列緊密。對照組可見心肌細(xì)胞明顯肥大，心肌纖維排列紊亂，細(xì)胞核增大、深染，心肌細(xì)胞水腫和可見心肌肌纖維斷裂。實(shí)驗(yàn)組可見心肌纖維排列較整齊，心肌細(xì)胞水腫較輕，未見心肌肌纖維斷裂。
　　 7、BNP水平的對比:注射MCT后4周末，測定空白組、PH組的BNP水平(

13、pg/ml)分別為(134.3±1.31)、(184.3±2.30)，PH組隨機(jī)分為對照組及實(shí)驗(yàn)組后BNP水平(pg/ml)分別為(185±7.53)、(183±9.07)，與空白組相比，PH組的BNP明顯升高(P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對照組及實(shí)驗(yàn)組的BNP水平相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.762);8周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，空白組、對照組及實(shí)驗(yàn)組的BNP(pg/ml)水平分別為(135±5.26)、(284±3.56)、（229±4.4

14、9），8周末對照組的BNP水平較4周末進(jìn)一步升高(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組的BNP水平與空白組相比時具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)及與對照組相比時實(shí)驗(yàn)組的BNP水平顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 8、ET-1及NO的對比:注射MCT4周末，測定空白組、PH組的ET-1水平(ng/L)分別為(49.26±1.72)、(59.05±1.92)，NO水平(umol/L)分別為:(69.19±1.63)、(39.54±1

15、.71);PH組分為對照組及實(shí)驗(yàn)組后ET-1水平(ng/L)分別為(59.24±3.77)、(58.87±2.88)，NO水平(umol/L)分別為:(38.33±2.12)、(40.80±2.08);與空白組相比，PH組的ET-1明顯升高(P＜0.05）、PH組的NO明顯降低，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);4周末對照組與實(shí)驗(yàn)組的ET-1及NO相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.851及P=0.432);8周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，測定空白組、對照組

16、及實(shí)驗(yàn)組的ET-1水平(ng/L)分別為(48.66±2.09)、(70.33±1.93)、（62.96±1.48），NO水平(umol/L)分別為:(66.73±1.70)、(32.86±1.57)、（59.54±2.17），8周末對照組的ET-1水平較4周末進(jìn)一步升高及NO水平4周末進(jìn)一步降低(P＜0.05)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，8周末實(shí)驗(yàn)組的ET-1及NO水平但較對照組有顯著變化，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與空白組相比時，實(shí)驗(yàn)

17、組的ET-1及NO水平同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、應(yīng)用野百合堿可以成功建立肺動脈高壓及右心室功能不全的模型。
　　 2、當(dāng)兔存在肺動脈高壓及右心功能不全時，可見ET-1分泌升高及NO分泌的降低，ET-1及NO的失衡可能參與了肺動脈高壓及右心功能不全的形成與惡化。
　　 3、當(dāng)兔存在肺動脈高壓及右心功能不全時，可見肺血管發(fā)生結(jié)構(gòu)重構(gòu)及右室室壁發(fā)生結(jié)構(gòu)重構(gòu)及可見BNP分泌升高