冬凌草甲素對(duì)人肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究冬凌草甲素（Oridnin）對(duì)人肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。
　　 方法：采用MTT法（3-（4，5-Dimethylthiazol-2-y1）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）檢測(cè)Oridnin對(duì)SPC-A-1細(xì)胞增殖的影響；相差顯微鏡、Hoechst33258熒光染色、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率；TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞

2、凋亡；分光光度法檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9活性；Real-timeRT-PCR、Western blot檢測(cè)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示Oridnin對(duì)SPC-A-1細(xì)胞具有增殖抑制作用，并具有時(shí)間和濃度依賴性；Hoechst33258熒光染色、相差顯微鏡和透射電鏡觀察證實(shí)Oridnin能使SPC-A-1細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、細(xì)胞核邊集、空泡變性、染色質(zhì)高度凝集等細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；流式

3、細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示Oridnin可誘導(dǎo)SPC-A-1細(xì)胞凋亡，20、30、4μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞凋亡率分別為3.2％、12.0％、34.1％（P<0.01），并使細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。40μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細(xì)胞12、24、48小時(shí)后凋亡率分別為4.1％、11.4％、34.1％，表明Oridnin能使細(xì)胞發(fā)生凋亡和周期阻滯，并呈現(xiàn)濃度、時(shí)間依賴趨勢(shì)。TUNEL檢測(cè)也證

4、實(shí)Oridnin能使SPC-A-1細(xì)胞凋亡，且呈現(xiàn)濃度依賴趨勢(shì)。分光光度法檢測(cè)Caspase3、Caspase9活性，發(fā)現(xiàn)給藥后細(xì)胞Caspase-3、Caspase-9活性增加。Real-time RT-PCRZ證實(shí)在mRNA水平Lp53、Caspase-3、bax、p21基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)，bcl-2、c-Myc基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)，Western blot結(jié)果顯示在蛋白水平上P53、Bax、P21上調(diào)表達(dá)，Bcl-2下調(diào)表達(dá)。
　　 結(jié)