高效液相色譜法測定大鼠肝微粒體CYP2C9和CYP3A酶活性以及芹菜素對其影響.pdf

1、目的：建立大鼠微粒體中探針藥物檢測的高效液相色譜方法，研究大鼠肝微粒體CYP2C9和CYP3A酶的活性以及芹菜素對酶活性的影響。
　　 方法：以雙氯芬酸鈉和咪達唑侖為探針藥。CYP2C9的測定采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱分離；流動相為乙腈-水-0.1％三氟乙酸；流速為1 mL·min-1；柱溫40℃；檢測波長為278 nm；大鼠肝微粒體加入雙氯芬酸鈉孵育30 min后，用鹽酸終止反應，加入內(nèi)標地西泮(10

2、0μ g·mL-1)50μ L和乙酸乙酯1 mL，渦旋后高速離心，取上層有機相吹干復溶進樣；計算Km和Vmax。CYP3A的測定采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱分離；流動相為乙腈-水-0.1%三氟乙酸；流速為1 mL·min-1；柱溫40℃；檢測波長為230 nm；大鼠肝微粒體加入咪達唑侖孵育5 min后，用乙酸乙酯終止反應，加入內(nèi)標卡馬西平(100μ g·mL-1)50μ L，渦旋后高速離心，取上層有機相吹干復溶進

3、樣；計算Km和Vmax。結(jié)果：4-羥基雙氯芬酸鈉在0.05～10μ M范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.9998)，測得Km=26.87μ M和Vmax=2.359 nmol/min/mg pro。1-羥基咪達唑侖濃度在0.01～0.25μ M范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.9996)，測得Km=9.42μ M和Vmax=0.29 nmol/min/mg pro。芹菜素對CYP2C9和CYP3A的具有抑制作用，IC50分別為10.37μ M，5.