中藥對大鼠CYP3A、CYP2E1和CYP2C9的抑制作用.pdf

1、中藥現(xiàn)代化是當(dāng)今中醫(yī)藥發(fā)展過程中所面臨的重大問題，而中藥的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究一直是中藥現(xiàn)代化的難點(diǎn)之一。大多數(shù)中藥在體內(nèi)的代謝尚不清楚，致使其臨床應(yīng)用缺乏科學(xué)依據(jù)，而影響療效或引起不良反應(yīng)。
　　 CYP450酶是藥物體內(nèi)代謝最重要的酶，其中6種重要的CYPs亞型：CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1和CYP3A4參與了約90％的臨床使用藥物的代謝。CYP450酶被抑制是引起藥物相互作用、導(dǎo)致藥

2、物不良反應(yīng)發(fā)生的重要原因。有關(guān)中藥對CYP450酶影響的報(bào)道較少，且主要集中在中藥有效成分、中藥提取物和單味中藥對CYP450酶單一亞型的影響。由于臨床使用多為中藥，而非單一有效成分；且中藥單獨(dú)使用、配伍應(yīng)用對CYP450酶的作用結(jié)果可能有較大差異甚至相反，因此進(jìn)行中藥對CYP450酶影響的相關(guān)研究已迫在眉睫。
　　 本研究通過體外實(shí)驗(yàn)篩選燈盞細(xì)辛注射液等37種中藥對大鼠CYP3A、CYP2E1和CYP2C9的抑制作用，并進(jìn)一步

3、通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究篩選出的中藥對大鼠CYP450酶的影響，以期豐富傳統(tǒng)中藥理論，指導(dǎo)臨床合理用藥。
　　 材料和方法:
　　 1.大鼠肝微粒體的制各大鼠斷頭處死，迅速取出肝臟，用冰凍的Tris緩沖液反復(fù)沖洗，采用鈣沉淀法制備肝微粒體，微粒體沉淀用蔗糖磷酸鹽緩沖液重懸，分裝，-70℃保存。
　　 2.微粒體蛋白含量的測定取牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制成的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取6μL標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入3 mL考馬斯亮藍(lán)染色液于595nm

4、波長處比色測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取已制備好的肝微粒體懸液6μL，進(jìn)行測定并計(jì)算微粒體蛋白的含量。
　　 3.孵育反應(yīng)孵育體系總體積500μL，反應(yīng)體系中包含NADPH，磷酸鹽緩沖液，EDTA，MgCl2，微粒體蛋白和探針?biāo)幬铮结標(biāo)幬锓謩e為咪達(dá)唑侖（10μmol·L-1），氯唑沙宗（100μmol·L-1），甲苯磺丁脲（20μmol·L-1），反應(yīng)在37℃水浴中進(jìn)行，預(yù)孵育5min，加入NADPH啟動(dòng)反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組，

5、實(shí)驗(yàn)組加入中藥，對照組加入等體積的磷酸鹽緩沖液。
　　 4.酶活性測定高效液相色譜法（HPLC）測定探針?biāo)幬餄舛龋蕴结標(biāo)幬锏纳镛D(zhuǎn)化程度作為酶活性指標(biāo)。
　　 5.刺五加注射液對大鼠CYP3A的抑制作用
　　 按照隨機(jī)對照原則，20只雄性SD大鼠分為2組，一組為對照組，每天尾靜脈注射生理鹽水（40ml·kg-1），連續(xù)給藥7天；另一組為實(shí)驗(yàn)組，每天尾靜脈注射刺五加注射液（40ml·kg-1），連續(xù)給藥7天，大鼠

6、斷頭處死，制備肝微粒體，測定肝微粒體的蛋白含量，進(jìn)行孵育反應(yīng)。
　　 6.統(tǒng)計(jì)分析
　　 應(yīng)用SPSS10.0軟件對各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)皆用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差（x±SD）表示，對照組與實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a為0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1.對CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9有抑制作用的中藥通過體外實(shí)驗(yàn)篩選發(fā)現(xiàn)燈盞細(xì)辛注射液、茵梔黃注射液、清開靈注射液、香丹注

7、射液、刺五加注射液、清熱解毒口服液和鼻淵舒口服液7種中藥對CYP3A有抑制作用（P<0.05）；茵梔黃注射液對CYP2E1有抑制作用；37種中藥對CYP2C9酶的活性均無抑制作用。
　　 2.中藥對CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9的ICse中藥對CYP450酶的抑制作用呈濃度依賴性，隨著中藥濃度的增加，其對CYP450酶的抑制作用也隨之增強(qiáng)，燈盞細(xì)辛注射液、茵梔黃注射液、清開靈注射液、香丹注射液、刺五加注射液、清熱解毒口

8、服液、鼻淵舒口服液對CYP3A酶的IC50分別為2.09ml·100ml-1、1.34ml·100ml-2、2.17 ml·100ml-1、1.97ml·100ml-1、5.00 ml·100ml-1、1.21 ml·100ml-1和1.14 ml·100ml-1；茵梔黃注射液對CYP2E1的IC50為1.17 ml·100ml-1。
　　 3.中藥與其成分的比較茵梔黃注射液、清開靈注射液、鼻淵舒口服液與其主要成分對CYP3A酶

9、的抑制作用相比均無顯著性差異，清熱解毒口服液對CYP3A的抑制作用顯著強(qiáng)于其所含成分（P<0.05）。茵梔黃注射液與其所含成分對CYP2E1的抑制作用相比無顯著性差異。
　　 4.刺五加注射液對大鼠CYP3A的抑制作用
　　 大鼠連續(xù)7天靜脈注射40ml·kg-1刺五加注射液，CYP3A酶活性顯著低于對照組（P<0.01），使探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖的代謝減少了約（21.11±9.39）％（P=0.002）。
　　 結(jié)論

10、:
　　 1.燈盞細(xì)辛注射液、茵梔黃注射液、清開靈注射液、香丹注射液、刺五加注射液、清熱解毒口服液和鼻淵舒口服液7種中藥體外對CYP3A酶活性具有抑制作用。
　　 2.茵梔黃注射液抑制CYP2E1酶的活性。
　　 3.37種中藥對CYP2C9酶活性均無抑制作用
　　 4.中藥對CYP450酶的抑制作用呈濃度依賴性，隨著中藥濃度的增加，對CYP450酶的抑制作用隨之增強(qiáng)。
　　 5.大鼠注射刺五加注